复合胶原/rhBMP-2壳聚糖微球的3D打印多孔羟基磷灰石支架的制备及其异位成骨研究
发布时间：2021-02-27 21:07
第一部分香草醛交联rhBMP-2/壳聚糖微球的制备及其对间充质干细胞的影响研究背景：RhBMP-2是一种重要的骨诱导活性蛋白,它在体内具有很强的诱导骨组织生成的能力。而既往的研究表明rhBMP-2在体内的释放模式对其诱导成骨的作用具有重要的影响,rhBMP-2早期的突释结合后期的持续释放较短时间大剂量释放能够更高效的诱导骨组织生成。壳聚糖是一种来源广泛的天然生物材料,具有良好的生物相容性,它可作为许多细胞因子的缓释载体。同时香草醛与传统的交联剂（戊二醛等）相比生物相容性更好。因此用香草醛为交联剂有可能制备出生物相容性更好,且具有良好缓释性能的rhBMP-2/壳聚糖微球。目的：以香草醛为交联剂来制备rhBMP-2/壳聚糖微球,明确该微球在体外rhBMP-2的缓释性能,并且明确微球缓释的rhBMP-2对骨髓间充质干细胞的影响。方法：利用乳化交联法来制备包载rhBMP-2的壳聚糖微球,用电镜观察微球的形态。以微球浸提液为实验组,以空白培养基为对照组来培养人间充质干细胞,以检测微球的细胞毒性和对细胞增殖的影响。用动态浸泡的方法来检测rhBMP-2的体外释放特征。通过比较缓释3天和7天获取的微球...
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１：扫描电镜观察合成微球的形貌??．?－
??的释放量最大（２５４．０６±％．１９ｎｇ／ｍＬ）（如图２所示），呈现突释效应。化ＢＭＰ－２??的释放速度随着时间的延长逐渐下降。到第１９天测得的缓释液中ｒｈＢＭＰ－２的浓??度为２１６．?１４?＋?２０．?ＯＯｎｇ／ｍＬ。缓释１９天累积释放的ｒｈＢＭＰ－２的含量约占３９．?６％。??３００?］??２５０?－?■■??－圆?ｉ??１?２００?－?＾?Ｔ?■??疆巧。Ａ丄Ｉ?Ｉ?Ｉ??ＩＩ??Ｑ?Ｊ＿＿＿１１Ｍ，，……Ｉ；纖齡Ｈ?ＨＨＬ???ｉｎｎ?１１１?ＨＨ?ＩＩＭ?ＨＨ．??１?３?５?７?１０?１４?１９??时间／天??图２．每个时间点收集的缓释液浓度，结果表示为Ｘ±Ｓ，ｎ＝３。??４．?ＡＬＰ活性检测??为了检测所包载的ｒｈＢＭＰ－２是否还具有成骨诱导活性，本实验将ｒｈＢＭＰ－２的??缓释液与ｈＭＳＣｓ细胞共培养７天，结果表明缓释３天与缓释７天所收集的缓释液??均能够促进ｈＭＳＣｓ细胞碱性碟酸酶活性的増高（分别为０．?５０４?＋?０．?０６日和０．?６８４??±?０．０６０?Ｕ?ｍｏｌ?ｐＮＰＰ／ｍｉｎ／ｍｇ?ｐｒｏｔｅｉｎ?），与对照组（０．?１３５?±?０．０１１?ｙ?ｍｏｌ??ｐＮＰＰ／ｍｉｎ／ｍｇ?ｐｒｏｔｅｉｎ）相比有盈著性差异（八０．０５）。并且缓释７天组谤导细胞??表达的ＡＬＰ活性较缓释３天组高（代０．?０５）。??讨论??人骨形态形成蛋白属于转化成生长因子－目（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ??ｇ
本研究Ｗ胶原为媒介，将香草酸交联的ｒｈＢＭＰ－２壳聚糖微球粘附于多孔??矮基磯灰石支架的表面，使所制各的ＨＣＣ支架能够逐渐的缓释ｒｈＢＭＰ－２促??进骨组织长入ＨＡ支架内部，模式图如图１所示。??２．２．１?胶原徐层?ＨＡ?支架的蒂！Ｊ备（ＨＡ／Ｃｏｌｌａｇｅｎ?ｓｃａｆｆｏｌｄ，?ＨＣ）??将Ｉ型牛胶原溶解于己酸（化０５Ｍ）溶液中，待胶原充分洛解后，用氨氧??化钢溶液将ＰＨ调节至中性，用ＭＥＳ缓冲液将胶原溶液浓度调节为Ｏ．ｌｇ／ｍｌ，??将高温蒸汽灭菌的ＨＡ支架浸入胶原溶解中浸泡化。将溶解于ＭＥＳ水中的??ＥＤＣ和ＮＨＳ加入上述胶原溶液中使最终浓度为２．５?ｍｇ／ｍｌ?ＥＤＣ和０．６３?ｍｇ／ｍｌ??ＮＨＳ对胶原进行交联［１气然后将吸附有胶原溶液的支架取出，在室温下真空??干燥２４小时，然后用ＰＢＳ水轻柔的冲洗支架２次，在室温下真空干燥２４小??时后，于－２０°低温冷冻保存，Ｗ上均在无菌的条件下进行。??２．２．２?胶原／ｒｈＢＭＰ－２?壳聚糖微球支架的制备（ＨＡ／Ｃｏｌｌａｇｅｎ／ＲｈＢＭＰ－２?ｃｈｉｔｏｓａｎ??ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ?ｓｃａｆｆｏｌｄ?，?ＨＣＣ）??本实验用滴加的方法将微球与胶原／ＨＡ支架复合
本文编号：3054800
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１：扫描电镜观察合成微球的形貌??．?－
??的释放量最大（２５４．０６±％．１９ｎｇ／ｍＬ）（如图２所示），呈现突释效应。化ＢＭＰ－２??的释放速度随着时间的延长逐渐下降。到第１９天测得的缓释液中ｒｈＢＭＰ－２的浓??度为２１６．?１４?＋?２０．?ＯＯｎｇ／ｍＬ。缓释１９天累积释放的ｒｈＢＭＰ－２的含量约占３９．?６％。??３００?］??２５０?－?■■??－圆?ｉ??１?２００?－?＾?Ｔ?■??疆巧。Ａ丄Ｉ?Ｉ?Ｉ??ＩＩ??Ｑ?Ｊ＿＿＿１１Ｍ，，……Ｉ；纖齡Ｈ?ＨＨＬ???ｉｎｎ?１１１?ＨＨ?ＩＩＭ?ＨＨ．??１?３?５?７?１０?１４?１９??时间／天??图２．每个时间点收集的缓释液浓度，结果表示为Ｘ±Ｓ，ｎ＝３。??４．?ＡＬＰ活性检测??为了检测所包载的ｒｈＢＭＰ－２是否还具有成骨诱导活性，本实验将ｒｈＢＭＰ－２的??缓释液与ｈＭＳＣｓ细胞共培养７天，结果表明缓释３天与缓释７天所收集的缓释液??均能够促进ｈＭＳＣｓ细胞碱性碟酸酶活性的増高（分别为０．?５０４?＋?０．?０６日和０．?６８４??±?０．０６０?Ｕ?ｍｏｌ?ｐＮＰＰ／ｍｉｎ／ｍｇ?ｐｒｏｔｅｉｎ?），与对照组（０．?１３５?±?０．０１１?ｙ?ｍｏｌ??ｐＮＰＰ／ｍｉｎ／ｍｇ?ｐｒｏｔｅｉｎ）相比有盈著性差异（八０．０５）。并且缓释７天组谤导细胞??表达的ＡＬＰ活性较缓释３天组高（代０．?０５）。??讨论??人骨形态形成蛋白属于转化成生长因子－目（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ??ｇ
本研究Ｗ胶原为媒介，将香草酸交联的ｒｈＢＭＰ－２壳聚糖微球粘附于多孔??矮基磯灰石支架的表面，使所制各的ＨＣＣ支架能够逐渐的缓释ｒｈＢＭＰ－２促??进骨组织长入ＨＡ支架内部，模式图如图１所示。??２．２．１?胶原徐层?ＨＡ?支架的蒂！Ｊ备（ＨＡ／Ｃｏｌｌａｇｅｎ?ｓｃａｆｆｏｌｄ，?ＨＣ）??将Ｉ型牛胶原溶解于己酸（化０５Ｍ）溶液中，待胶原充分洛解后，用氨氧??化钢溶液将ＰＨ调节至中性，用ＭＥＳ缓冲液将胶原溶液浓度调节为Ｏ．ｌｇ／ｍｌ，??将高温蒸汽灭菌的ＨＡ支架浸入胶原溶解中浸泡化。将溶解于ＭＥＳ水中的??ＥＤＣ和ＮＨＳ加入上述胶原溶液中使最终浓度为２．５?ｍｇ／ｍｌ?ＥＤＣ和０．６３?ｍｇ／ｍｌ??ＮＨＳ对胶原进行交联［１气然后将吸附有胶原溶液的支架取出，在室温下真空??干燥２４小时，然后用ＰＢＳ水轻柔的冲洗支架２次，在室温下真空干燥２４小??时后，于－２０°低温冷冻保存，Ｗ上均在无菌的条件下进行。??２．２．２?胶原／ｒｈＢＭＰ－２?壳聚糖微球支架的制备（ＨＡ／Ｃｏｌｌａｇｅｎ／ＲｈＢＭＰ－２?ｃｈｉｔｏｓａｎ??ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ?ｓｃａｆｆｏｌｄ?，?ＨＣＣ）??本实验用滴加的方法将微球与胶原／ＨＡ支架复合
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