缓释KGN的PLGA微球/软骨ECM复合支架促软骨再生的研究
发布时间：2021-03-24 05:17
目的:关节软骨缺损修复一直是临床治疗的难题,已有研究表明kartogenin（KGN）能够有效促进骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化,进而修复软骨缺损。本实验旨在构建一种基于软骨细胞外基质（CECM）的能够缓释KGN的复合支架,将KGN的促进作用与CECM多孔支架的优势性能结合起来,达到既能缓释KGN,延长其作用时间,又能维持支架内部细胞保持较高活性的目的,为KGN的应用提供新的思路和方向。方法:1.采用乳化法制备PLGA微球,采用超声法制备PLGA纳米球,通过扫描电镜（SEM）或透射电镜（TEM）观察微球或纳米球的形态,通过Nano zs90观察粒径尺寸分布。采用高效液相色谱法测定KGN浓度,对比两种粒子负载KGN的载药量和包封率,筛选出PLGA微球进行后续实验。将猪膝关节软骨进行脱脂、脱细胞等处理提取CECM,配制成3%匀浆后与适量PLGA微球充分混匀,采用冷冻干燥法制备PLGA（KGN）/CECM复合支架。为了验证此支架对KGN的缓释效果,制备KNG与CECM匀浆直接复合的支架作为对照组,对比两种支架缓释KGN的效果差异。将KGN/CECM与PLGA（KGN）/CECM这两种负载KG...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CECM与PLGA微球复合模式图
图 1.4 KGN 标准曲线图表 2 所示，设置每组 n=3，PLGA 微球样品 280nm 处吸收峰面积869.4，即 Y=744869.4，代入公式得到 X=184.36μg/ml，PLGA 微球总体积为6.5ml，则样品中KGN含量为1.2mg。总投入KGN含量为 含量为 20mg，则包封率=1.2/1.5×100%=80%，载药量=1.2/（1.2+=5.6%。样方法计算 PLGA 纳米球的包封率和载药量，得到 280nm 处吸收为 127，即 Y=127，代入公式得到 X=13.3μg/ml，PLGA 纳米球悬积为 6.5ml，则样品中 KGN 含量为 0.086mg。总投入 KGN 含量为 含量为 20mg，则包封率=0.086/1.5×100%=5.7%，载药量=0.086/（1=0.4%（表 2，图 1.5）。此比较可发现，此方法制备的 PLGA 包封率和载药量均高于 PLG此选用 PLGA 微球进行后续实验。
图 1.5 PLGA 微球和纳米球包封率和载药量1.2.4 CECM 复合支架体系的表征1.2.4.1 PLGA（KGN）/CECM 体系的制备如图所示（图 1.6），（A）为猪膝关节软骨切取部位，（B）为切下骨片，（C）为经过组织匀浆机低温粉碎后得到的较为细致的组织匀浆，前经过仔细清洗，因此匀浆中不掺杂血液以及骨组织等其他成分；（D）温下经过四次差速离心获得的最细致的组织匀浆，无肉眼可见的明显软骨匀浆具有粘稠性和缓慢流动性；（E）为经过 1%Triton-X100 的 Tris-HCL处理 24 小时后的组织匀浆，溶液中产生大量泡沫，除此之外大体观无明显（F）为脱脂处理后经过高速离心和反复清洗后得到的组织匀浆沉淀物，可骨匀浆呈白色半透明状，肉眼观光滑细腻无任何可见杂志或颗粒，具有更粘稠度和缓慢的流动性；（G）为脱脂后的组织匀浆经过 DNA 酶和 RNA合液处理后得到的混合物，可见混合液较上一阶段更为透明；（H）为酶
【参考文献】：
期刊论文
[1]关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的制备及评估[J]. 肖统光,郝春香,荆晓光,刘雪剑,郭岗岗,杨建华,郭全义. 中国组织工程研究. 2017(22)
[2]基于软骨细胞外基质的取向支架的制备及评价[J]. 李坤,赵艳红,徐晨,王连永,杨强,李洪发,滕彬宏. 华西口腔医学杂志. 2017(01)
[3]细胞外基质来源支架在软骨组织工程中的应用[J]. 肖统光,张一民,郭维民,刘舒云,杨建华,郭全义. 中国组织工程研究. 2016(38)
[4]组织工程修复髁突软骨-骨复合体缺损研究进展[J]. 王飞宇,何冬梅,杨秀娟. 中国实用口腔科杂志. 2016(03)
[5]Kartogenin induces cartilage-like tissue formation in tendon–bone junction[J]. Jianying Zhang,James H-C Wang. Bone Research. 2014(01)
[6]透明软骨材料经脱细胞处理后细胞外基质成分变化的比较[J]. 谭洪波,段小军,杨柳,徐永清,丁晶,杨军. 第三军医大学学报. 2013(19)
[7]软骨细胞外基质对脐带Wharton胶间充质干细胞生物学性状的作用[J]. 赵鹏,刘舒云,卢世璧,杨建华,袁玫,张莉,黄靖香,赵斌,眭翔,许文静,郭全义. 中国矫形外科杂志. 2013(11)
[8]可注射性组织工程软骨源性微载体的微观结构及其生物相容性观察[J]. 卢强,张莉,彭江,许瑞江,黄靖香,郭全义,卢世璧. 中国矫形外科杂志. 2009(09)
[9]髁状突软骨缺损自身修复能力的实验研究[J]. 韩传火,李金荣,胡传真. 口腔颌面外科杂志. 1994(02)
博士论文
[1]细胞外基质支架材料在软骨组织再生和骨组织工程中应用的初步探讨[D]. 王之发.第四军医大学 2016
[2]自体骨髓间充质干细胞外基质（ECM）支架在软骨组织工程中的应用研究[D]. 唐成.南京医科大学 2013
[3]以软骨细胞外基质为基础构建组织工程软骨以及骨软骨复合体的实验研究[D]. 杨强.中国人民解放军军医进修学院 2008
硕士论文
[1]关节软骨细胞外基质源性微粒的制备及生物相容性评估[D]. 李丙岩.中国人民解放军医学院 2014
本文编号：3097132
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CECM与PLGA微球复合模式图
图 1.4 KGN 标准曲线图表 2 所示，设置每组 n=3，PLGA 微球样品 280nm 处吸收峰面积869.4，即 Y=744869.4，代入公式得到 X=184.36μg/ml，PLGA 微球总体积为6.5ml，则样品中KGN含量为1.2mg。总投入KGN含量为 含量为 20mg，则包封率=1.2/1.5×100%=80%，载药量=1.2/（1.2+=5.6%。样方法计算 PLGA 纳米球的包封率和载药量，得到 280nm 处吸收为 127，即 Y=127，代入公式得到 X=13.3μg/ml，PLGA 纳米球悬积为 6.5ml，则样品中 KGN 含量为 0.086mg。总投入 KGN 含量为 含量为 20mg，则包封率=0.086/1.5×100%=5.7%，载药量=0.086/（1=0.4%（表 2，图 1.5）。此比较可发现，此方法制备的 PLGA 包封率和载药量均高于 PLG此选用 PLGA 微球进行后续实验。
图 1.5 PLGA 微球和纳米球包封率和载药量1.2.4 CECM 复合支架体系的表征1.2.4.1 PLGA（KGN）/CECM 体系的制备如图所示（图 1.6），（A）为猪膝关节软骨切取部位，（B）为切下骨片，（C）为经过组织匀浆机低温粉碎后得到的较为细致的组织匀浆，前经过仔细清洗，因此匀浆中不掺杂血液以及骨组织等其他成分；（D）温下经过四次差速离心获得的最细致的组织匀浆，无肉眼可见的明显软骨匀浆具有粘稠性和缓慢流动性；（E）为经过 1%Triton-X100 的 Tris-HCL处理 24 小时后的组织匀浆，溶液中产生大量泡沫，除此之外大体观无明显（F）为脱脂处理后经过高速离心和反复清洗后得到的组织匀浆沉淀物，可骨匀浆呈白色半透明状，肉眼观光滑细腻无任何可见杂志或颗粒，具有更粘稠度和缓慢的流动性；（G）为脱脂后的组织匀浆经过 DNA 酶和 RNA合液处理后得到的混合物，可见混合液较上一阶段更为透明；（H）为酶
【参考文献】：
期刊论文
[1]关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的制备及评估[J]. 肖统光,郝春香,荆晓光,刘雪剑,郭岗岗,杨建华,郭全义. 中国组织工程研究. 2017(22)
[2]基于软骨细胞外基质的取向支架的制备及评价[J]. 李坤,赵艳红,徐晨,王连永,杨强,李洪发,滕彬宏. 华西口腔医学杂志. 2017(01)
[3]细胞外基质来源支架在软骨组织工程中的应用[J]. 肖统光,张一民,郭维民,刘舒云,杨建华,郭全义. 中国组织工程研究. 2016(38)
[4]组织工程修复髁突软骨-骨复合体缺损研究进展[J]. 王飞宇,何冬梅,杨秀娟. 中国实用口腔科杂志. 2016(03)
[5]Kartogenin induces cartilage-like tissue formation in tendon–bone junction[J]. Jianying Zhang,James H-C Wang. Bone Research. 2014(01)
[6]透明软骨材料经脱细胞处理后细胞外基质成分变化的比较[J]. 谭洪波,段小军,杨柳,徐永清,丁晶,杨军. 第三军医大学学报. 2013(19)
[7]软骨细胞外基质对脐带Wharton胶间充质干细胞生物学性状的作用[J]. 赵鹏,刘舒云,卢世璧,杨建华,袁玫,张莉,黄靖香,赵斌,眭翔,许文静,郭全义. 中国矫形外科杂志. 2013(11)
[8]可注射性组织工程软骨源性微载体的微观结构及其生物相容性观察[J]. 卢强,张莉,彭江,许瑞江,黄靖香,郭全义,卢世璧. 中国矫形外科杂志. 2009(09)
[9]髁状突软骨缺损自身修复能力的实验研究[J]. 韩传火,李金荣,胡传真. 口腔颌面外科杂志. 1994(02)
博士论文
[1]细胞外基质支架材料在软骨组织再生和骨组织工程中应用的初步探讨[D]. 王之发.第四军医大学 2016
[2]自体骨髓间充质干细胞外基质（ECM）支架在软骨组织工程中的应用研究[D]. 唐成.南京医科大学 2013
[3]以软骨细胞外基质为基础构建组织工程软骨以及骨软骨复合体的实验研究[D]. 杨强.中国人民解放军军医进修学院 2008
硕士论文
[1]关节软骨细胞外基质源性微粒的制备及生物相容性评估[D]. 李丙岩.中国人民解放军医学院 2014
本文编号：3097132
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