超声微泡破坏增强基因转染效率的体外研究

发布时间：2021-03-30 20:02

　　第一部分不同超声微泡浓度及质粒浓度对pEGFP-N1-VEGF重组质粒转染效率的研究目的探讨不同微泡浓度及质粒浓度对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）存活率及pEGFP-N1-VEGF重组质粒转染率的影响,初步探索最佳的质粒浓度及微泡浓度。方法将状态良好的HUVEC交叉植入24孔板中的,对照组仅进行超声辐照,实验组中加入不同质粒浓度和微泡浓度,然后进行超声辐照。加入质粒使其终浓度分别为5μl/ml、10μl/ml、15μl/ml、20μl/ml、25μl/ml、30μl/ml,加入微泡使其终浓度分别为0μl/ml、50μl/ml、100μl/ml、150μl/ml、200μl/ml、250μl/ml。48h后台盼蓝染色检测细胞存活率,荧光显微镜定性观察绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪定量检测基因转染率,并用western-blotting对导入外源性基因在离体细胞中表达VEGF进行检测。结果实验组中各亚组均有不同程度地荧光蛋白的表达。当质粒浓度小于等于20μl/ml时,基因转染率随质粒浓度的增加而增加,差异有统计学意义（P<0.05）;但大于20μl/ml时,基因转染率随质粒浓度增加改... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

一定超声参数时（发射频率1MHZ，功率1W/cm2，占空比20%，辐照时间

21图 3. 光学显微镜下观察不同微泡浓度时 HUVEC 细胞存活率（100×）A：空白对照组 B：质粒浓度 20μl/ml，微泡浓度 50μC：质粒浓度 20μl/ml，微泡浓度 150μl/ml D：质粒浓度 20μl/ml，微泡浓度 300μ对照组、实验各亚组，细胞存活率两两比较，差异均有统计学差异（P<0.05

4. 荧光显微镜下不同微泡浓度时 HUVEC 细胞内 pEGFP-N1-VEGF 重组染情况（100×）：空白对照组（排除细胞自发荧光） B：质粒浓度 20μl/ml，微泡浓度 5：质粒浓度 20μl/ml，微泡浓度 150μl/ml D：质粒浓度 20μl/ml，微泡浓度 30

【参考文献】：
期刊论文
[1]超声靶向微泡破裂法介导RNA干扰沉默survivin基因对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响[J]. 陈智毅,梁琨,谢明星,张静.  肿瘤. 2009(07)
[2]超声空化机理及其在抗癌领域应用的研究进展[J]. 刘全宏,代乐,齐浩.  临床超声医学杂志. 2006(04)



本文编号：3110066