聚L-谷氨酸/壳聚糖材料在脂肪组织工程以及胆管癌三维培养模型中应用的实验研究

发布时间：2021-04-10 08:18

　　第一部分聚L-谷氨酸/壳聚糖材料在脂肪组织工程中应用的实验研究目的每年全世界有数百万的患者因创伤、肿瘤切除手术和先天性发育缺陷等原因会导致的大面积软组织缺损,大范围的软组织缺损是无法自愈的,需要通过手术进行等方法修复重建。组织修复重建的主要目的不仅仅是恢复正常的组织结构,更重要的是通过对缺损的修复,恢复正常的组织功能,减轻患者焦虑、自卑等不良心理。传统的软组织修复重建方法主要包括游离脂肪移植,复合组织瓣移植或人工合成替代物的植入等方式,它们都存在着各自的缺点,如游离脂肪移植成活率低、容易吸收（体积降低40%-60%）；复合组织瓣移植,对供区组织损伤大,操作复杂,不易塑形；人工合成替代物,如硅胶等可能会引起机体不同程度的排异反应,长期效果可能不理想。随着细胞生物学与生物材料科学的发展,以种子细胞、支架材料构建组织为基本特征的组织工程学应运而生,为解决组织乃至器官缺损提供了新的思路。脂肪组织工程的基本策略就是利用种子细胞与具有生物相容性和生物降解性的生物材料结合经过生长因子诱导构建脂肪组织。成功构建组织工程化脂肪的关键在于：①种子细胞的选择和获得；②具有良好生物降解性和组织相容性的三维支架... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：174 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
符号说明
第一部分 聚L-谷氨酸/壳聚糖材料在脂肪组织工程应用的实验研究
    前言
    材料
    方法
        一、人脂肪干细胞体外成脂分化潜能的研究
            1. ADSCs的分离与培养
            2. 流式细胞术检测ADSCs分化群表面抗体的表达
            3. ADSCs成骨、成脂、成软骨三向分化性能的鉴定
            4. 油红O染色及定量
        二、ADSCs于PLGA/CS支架材料体外成脂的研究
            1. PLGA/CS支架材料的制备
            2. ADSCs在PLGA/CS支架材料上的接种
            3. ADSCs在PLGA/CS支架上的粘附与细胞外基质分泌的观测
            4. DiL荧光标记观测ADSCs在PLGA/CS支架材料上的增殖情况
            5. ADSCs在PLGA/CS支架材料上的生长曲线检测
            6. PLGA/CS支架材料细胞毒性的检测
            7. ADSCs接种于PLGA/CS支架材料后成脂分化的检测
        三、ADSCs-PLGA/CS复合物体内成脂的研究
        四、统计学分析
    结果
        一、人脂肪干细胞体外成脂分化潜能的研究
            1. ADSCs分化群表面抗原的表达
            2. ADSCs三向分化能力的检测
            3. ADSCs体外成脂油红O染色及定量
        二、ADSCs于PLGA/CS支架材料体外成脂的研究
            1. ADSCs于PLGA/CS材料上的粘附、细胞外基质分泌及增值情况的检测
            2. PLGA/CS支架材料的细胞毒性检测
            3. ADSCs接种于PLGA/CS支架材料后的成脂分化的检测
        三、体内脂肪形成及回植物体积的测定
    讨论
    小结
    附图表
    参考文献
第二部分 聚L-谷氨酸/壳聚糖支架材料在构建胆管癌三维培养模型中应用的实验研究
    第一节 TGF-β1诱导人胆管癌HCCC9810细胞发生上皮-间质转化的研究
        前言
        材料
        方法
            一、HCCC9810细胞培养及诱导
            二、体外划痕试验
            三、细胞免疫荧光染色
            四、real-time PCR
            五、Western blot检测
            六、统计学分析
        结果
            一、TGF-β1诱导HCCC9810细胞发生形态发生变化,移动能力增强
            二、EMT各指标的蛋白水平和mRNA水平的变化
        讨论
        小结
    第二节 聚L-谷氨酸/壳聚糖支架构建三维培养模型及对肿瘤生长及侵袭的影响
        前言
        材料
        方法
            一、HCCC9810细胞的培养
            二、PLGA/CS支架材料的制备
            三、HCCC9810细胞接种于PLGA/CS支架材料
            四、HCCC9810细胞在PLGA/CS支架材料上的粘附和细胞外基质分泌的检测
            五、DiL荧光标记观测HCCC9810细胞在PLGA/CS材料表面的增殖情况
            六、DNA标记法检测HCCC9810细胞于PLGA/CS材料上的生长曲线
            七、real-time PCR对细胞-材料复合物的EMT相关指标及TGF-β1的mRNA水平的检测
            八、统计学分析
        结果
            一、HCCC9810细胞于PLGA/CS材料上粘附和生长增殖情况
            二、PLGA/CS支架为基础的三维培养模型对HCCC9810细胞EMT各指标及TGF-β1表达的影响
        讨论
        小结
    附图表
    参考文献
致谢
在读期间主要科研成果
附件1 文献综述
附件2 英文文章1
附件3 英文文章2
学位论文评阅及答辩情况表



本文编号：3129300