PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在纳米氧化锌致BV-2细胞毒性中的作用研究

发布时间：2021-04-17 14:47

　　研究背景纳米氧化锌广泛应用于口腔医学领域。动物体内研究表明,其颗粒能通过血脑屏障和神经通路进入个体中枢神经系统（CNS）,并导致脑组织损伤。目前引起损伤的分子机制虽尚无定论,但线粒体损伤是公认的的早期毒性表现。线粒体自噬是一种选择性清除多余或受损线粒体的途径,在调节细胞内线粒体数量、维持线粒体正常功能等方面发挥重要作用。那么,纳米氧化锌引起的CNS毒性过程中,是否有线粒体自噬参与?目前尚未见到相关研究对其进行探讨。研究目的本项目拟通过基因干扰技术构建PINK1基因沉默的BV-2细胞模型,然后通过比较纳米氧化锌处理后,两种类型细胞在增殖能力、细胞内线粒体自噬的启动、线粒体膜电位的变化、以及线粒体自噬相关蛋白的表达水平等方面的差异。探讨在纳米氧化锌颗粒导致的BV-2细胞毒性中,PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬所发挥的作用。材料与方法采用TEM、DLS、Zeta、BET测量仪及X射线能谱仪对材料进行表征。通过RNAi技术获得PINK1基因沉默细胞株,用含不同浓度纳米氧化锌培养基分别处理正常细胞,通过CCK8法确定最佳浓度。然后根据纳米氧化锌作用时间,将野生型和基因沉默型两种细胞各... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：106 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１?ＰＩＮＫｌ／Ｐａｒｋｉｎ介导的线粒体自噬示意图

??ＲａｏｏｒｃＭｉＺｎＯｌｌ??图１－２纳米氧化锌颗粒的水合粒径，可见颗粒在去离子水中的粒径主要分布在５００．８?ｎｍ左右??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｔｈｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ－ｗｅｉｇｈｔｅｄ?ａｖｅｒａｇｅ?ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ?ｄｉａｍｅｔｅｒ?ｏｆ?ＺｎＯ?ＮＰｓ．?Ｔｈｅ?ｆｉｇｕｒｅ?ｓｈｏｗｓ??ｔｈｅ?ｐａｒｔｉｃｌｅ?ｓｉｚｅ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｄｅｉｏｎｉｚｅｄ?ｗａｔｅｒ?ｉｓ?ｍａｉｎｌｙ?ａｂｏｕｔ?５００．８?ｎｍ．??２．３纳米氧化锌颗粒的衍射图谱分析??ＸＲＤ结果显示待测颗粒的波峰与氧化锌的波峰相一致（图１－３）。??５０００－Ｉ???４０００－??Ｓ?３０００?－??ＣＤ??吝??＾?２０００－??０）??Ｉ?．?ｉ．ｉ．?｜?，?Ｉ?．?｜?，?｜?．??１０?２０?３０?４０?５０?６０?７０?８０??２６°??图１－３纳米氧化锌颗粒的Ｘ射线衍射图谱??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｔｈｅ?Ｘ－ｒａｙ?Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ?Ｐａｔｔｅｒｎ?ｏｆ?ＺｎＯ?ＮＰｓ??９??

图２－１正常ＢＶ－２细胞形态（６〇ｘ）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｔｈｅ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｎｏｒｍａｌ?ＢＶ－２?ｃｅｌｌｓ?（６〇ｘ?）??１．３．２纳米氧化锌母液配置：??将纳米氧化锌灭菌使用６（）钴照射灭菌后，用生理盐水配制成１００吨／ｍＬ纳颗粒混悬液母液，使用漩涡振荡器初步混悬，置于超声清洗仪中４°Ｃ以下超声振??荡８?ｈ，振动频率为６０?Ｈｚ，使纳米颗粒分散均匀。在超声过程中，每间隔１０?ｍｉｎ??行漩涡混匀１次，制成纳米氧化锌悬液。每次使用前再行漩涡混匀、６０?Ｈｚ超声??分散。??１．３．３纳米氧化锌对ＢＶ－２细胞增殖能力影响??采用ＣＣＫ－８细胞増殖能力实验测定纳米氧化锌对ＢＶ－２活力的影响。将??ＢＶ－２细胞按照５ｘｌ〇３每孔的密度接种到９６孔板中，每孔加细胞培养液１００?ｐＬ，??３７°Ｃ二氧化碳培养箱恒温培养。２４?ｈ后观察细胞贴壁及生长情况，小心吸弃９６??

【参考文献】：
期刊论文
[1]线粒体自噬的研究方法[J]. 张迎梅,邱倩,漆永梅.  兰州大学学报(自然科学版). 2013(05)
[2]雌激素调节能量代谢的神经元保护作用[J]. 沈丽霞,张丹参.  神经药理学报. 2012(01)
[3]线粒体与神经退行性疾病[J]. 周晓雯,苏朝芬,罗焕敏.  神经药理学报. 2011(03)

硕士论文
[1]产前暴露于纳米氧化锌对大鼠子代脑发育及成年期行为学特性的影响[D]. 冯晓黎.南方医科大学 2016



本文编号：3143639