聚羟基脂肪酸酯经细胞黏附肽KQAGDV仿生修饰后的细胞相容性研究
发布时间：2021-05-12 08:41
聚羟基脂肪酸酯（Polyhydroxyalkanoates, PHAs）为生物绿色合成,具有生物可降解性、优良的生物相容性以及可控的力学性能,在组织工程支架材料领域受到广泛的关注与研究。PHAs在细菌体内以包涵体颗粒的形式存在,许多蛋白位于PHAs颗粒的表面,其中包括调控蛋白PhaR。细胞黏附肽KQAGDV（Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val）六肽序列是细胞表面整合素的非特异性配体之一,能够有效促进细胞,特别是血管平滑肌细胞的黏附。本论文构建、表达并纯化PhaR-KQAGDV融合蛋白,通过PhaR蛋白与PHAs材料的疏水结合,介导细胞黏附肽KQAGDV对PHAs材料表面进行仿生修饰,以期提高其细胞相容性,进一步拓宽PHAs在组织工程研究领域的开发应用。本工作对PHAs材料表面进行PhaR介导的KQAGDV多肽仿生修饰,以未经蛋白修饰的和只用PhaR蛋白修饰的材料为对照,探讨KQAGDV六肽对PHAs材料细胞相容性的促进作用。通过荧光显微镜观察PhaR-EGFP蛋白在不同PHAs材料表面的结合情况,明亮的绿色荧光说明PhaR蛋白能够很好的吸附于材料表面。静态水接触角检测结果表...
【文章来源】：汕头大学广东省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
论文中重要的缩略词
第一章 引言
1.1 组织工程概述
1.2 组织工程支架材料
1.2.1 支架材料的作用及理想支架材料的要求
1.2.2 组织工程材料的发展趋势
1.3 组织工程材料的相容性
1.3.1 材料的相容性
1.3.2 细胞外基质分子
1.3.3 生物材料和细胞的相互作用
1.4 组织工程材料表面修饰
1.4.1 在材料表面固定蛋白质
1.4.2 在材料表面固定氨基酸
1.4.3 在材料表面固定多肽
1.5 仿生修饰肽KQAGDV 简介
1.6 聚羟基脂肪酸酯在组织工程中的应用
1.6.1 聚羟基脂肪酸酯概述
1.6.2 聚羟基脂肪酸酯的生物相容性
1.6.3 聚羟基脂肪酸酯在体内的自然分布
1.6.4 聚羟基脂肪酸酯的体内生物吸收性
1.7 聚羟基脂肪酸酯颗粒表面结合蛋白
1.7.1 PHA 聚合酶(Synthase, PhaC)
1.7.2 PHA 解聚酶(Depolymerase, PhaZ)
1.7.3 PHA 颗粒结合蛋白（Phasins, PhaP）
1.7.4 调控蛋白（Regulator protein, PhaR）
1.8 论文的目的及意义
第二章 实验材料与方法
2.1 蛋白PhaR 和PhaR-KQAGDV 的质粒构建与表达
2.1.1 菌种与质粒
2.1.2 聚合酶链式反应（PCR）所用引物
2.1.3 分子量标准
2.1.4 分子生物学常用的工具酶
2.1.5 分子生物学常用的试剂盒
2.1.6 常用生化试剂
2.1.7 常用仪器和设备
2.1.8 常用培养基的配制
2.1.9 分子生物学常用溶液及缓冲液的配制
2.1.10 分子生物学基本操作
2.1.11 菌种保存方法
2.1.12 融合蛋白的表达与制备
2.1.13 融合蛋白的纯化
2.1.14 蛋白透析
2.1.15 少量细菌总蛋白裂解液的制备
2.1.16 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.1.17 蛋白质含量的测定
2.2 PHAs 材料的制备及参数评价
2.2.1 PHAs 及PLA 材料成膜
2.2.2 膜表面形貌表征
2.2.3 荧光显微镜观察PhaR 蛋白在不同PHAs 材料上的吸附情况
2.2.4 PhaR-KQAGDV 蛋白表面修饰PHAs 膜
2.2.5 样品接触角测量
2.3 细胞相容性评价
2.3.1 药品及试剂
2.3.2 常用溶液
2.3.3 常用仪器设备
2.3.4 细胞复苏
2.3.5 细胞传代
2.3.6 细胞接种和培养
2.3.7 仿生修饰后PHAs 材料的细胞相容性研究
2.4 统计学方法
第三章 PhaR、PhaR-KQAGDV 蛋白的质粒构建、表达与纯化
3.1 重组质粒的构建
3.2 融合蛋白的诱导表达及纯化
3.3 讨论
第四章 材料的制备及性能评价
4.1 不同PHAs 膜的表面形貌观察
4.2 荧光显微镜观察PhaR-EGFP 蛋白在不同材料上的吸附情况
4.3 蛋白PhaR-KQAGDV 修饰前后PHAs 静态水接触角变化
4.4 讨论
第五章 仿生修饰后PHAs 材料的细胞相容性研究
5.1 蛋白PhaR-KQAGDV 在膜表面的吸附性能评价
5.2 细胞黏附表征
5.2.1 CCK-8 试验测定HuSMCs 代谢活性
5.2.2 激光共聚焦显微镜观察HuSMCs 数目变化
5.3 细胞增殖表征
5.3.1 CCK-8 试验测定HuSMCs 代谢活性
5.3.2 SEM 观察HuSMCs 在PHAs 膜上的分布和形貌
5.4 讨论
第六章 结论
参考文献
致谢
个人简历及发表论文情况
在校期间发表论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]组织工程支架材料研究进展[J]. 焦国豪. 化工中间体. 2007(04)
[2]生物材料和再生医学的进展[J]. 孙雪,奚廷斐. 中国修复重建外科杂志. 2006(02)
[3]组织工程学的研究进展[J]. 曹谊林. 中国美容医学. 2005(02)
[4]Biocompatibility of Modified Poly-β-Hydroxybutyric Acid to Adrenocortical Cells[J]. 吴天鹏. Journal of Wuhan University of Technology-Materials Science. 2004(02)
[5]骨组织工程支架及生物材料研究[J]. 方丽茹,翁文剑,沈鸽,韩高荣,Santos JD. 生物医学工程学杂志. 2003(01)
[6]骨组织工程及可吸收高分子支架的研究进展[J]. 马朋高,游秀东,高建平,于九皋,姚康德. 化学通报. 2001(07)
[7]可生物降解的高分子类型、合成和应用[J]. 王身国. 化学通报. 1997(02)
本文编号：3183108
【文章来源】：汕头大学广东省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
论文中重要的缩略词
第一章 引言
1.1 组织工程概述
1.2 组织工程支架材料
1.2.1 支架材料的作用及理想支架材料的要求
1.2.2 组织工程材料的发展趋势
1.3 组织工程材料的相容性
1.3.1 材料的相容性
1.3.2 细胞外基质分子
1.3.3 生物材料和细胞的相互作用
1.4 组织工程材料表面修饰
1.4.1 在材料表面固定蛋白质
1.4.2 在材料表面固定氨基酸
1.4.3 在材料表面固定多肽
1.5 仿生修饰肽KQAGDV 简介
1.6 聚羟基脂肪酸酯在组织工程中的应用
1.6.1 聚羟基脂肪酸酯概述
1.6.2 聚羟基脂肪酸酯的生物相容性
1.6.3 聚羟基脂肪酸酯在体内的自然分布
1.6.4 聚羟基脂肪酸酯的体内生物吸收性
1.7 聚羟基脂肪酸酯颗粒表面结合蛋白
1.7.1 PHA 聚合酶(Synthase, PhaC)
1.7.2 PHA 解聚酶(Depolymerase, PhaZ)
1.7.3 PHA 颗粒结合蛋白（Phasins, PhaP）
1.7.4 调控蛋白（Regulator protein, PhaR）
1.8 论文的目的及意义
第二章 实验材料与方法
2.1 蛋白PhaR 和PhaR-KQAGDV 的质粒构建与表达
2.1.1 菌种与质粒
2.1.2 聚合酶链式反应（PCR）所用引物
2.1.3 分子量标准
2.1.4 分子生物学常用的工具酶
2.1.5 分子生物学常用的试剂盒
2.1.6 常用生化试剂
2.1.7 常用仪器和设备
2.1.8 常用培养基的配制
2.1.9 分子生物学常用溶液及缓冲液的配制
2.1.10 分子生物学基本操作
2.1.11 菌种保存方法
2.1.12 融合蛋白的表达与制备
2.1.13 融合蛋白的纯化
2.1.14 蛋白透析
2.1.15 少量细菌总蛋白裂解液的制备
2.1.16 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.1.17 蛋白质含量的测定
2.2 PHAs 材料的制备及参数评价
2.2.1 PHAs 及PLA 材料成膜
2.2.2 膜表面形貌表征
2.2.3 荧光显微镜观察PhaR 蛋白在不同PHAs 材料上的吸附情况
2.2.4 PhaR-KQAGDV 蛋白表面修饰PHAs 膜
2.2.5 样品接触角测量
2.3 细胞相容性评价
2.3.1 药品及试剂
2.3.2 常用溶液
2.3.3 常用仪器设备
2.3.4 细胞复苏
2.3.5 细胞传代
2.3.6 细胞接种和培养
2.3.7 仿生修饰后PHAs 材料的细胞相容性研究
2.4 统计学方法
第三章 PhaR、PhaR-KQAGDV 蛋白的质粒构建、表达与纯化
3.1 重组质粒的构建
3.2 融合蛋白的诱导表达及纯化
3.3 讨论
第四章 材料的制备及性能评价
4.1 不同PHAs 膜的表面形貌观察
4.2 荧光显微镜观察PhaR-EGFP 蛋白在不同材料上的吸附情况
4.3 蛋白PhaR-KQAGDV 修饰前后PHAs 静态水接触角变化
4.4 讨论
第五章 仿生修饰后PHAs 材料的细胞相容性研究
5.1 蛋白PhaR-KQAGDV 在膜表面的吸附性能评价
5.2 细胞黏附表征
5.2.1 CCK-8 试验测定HuSMCs 代谢活性
5.2.2 激光共聚焦显微镜观察HuSMCs 数目变化
5.3 细胞增殖表征
5.3.1 CCK-8 试验测定HuSMCs 代谢活性
5.3.2 SEM 观察HuSMCs 在PHAs 膜上的分布和形貌
5.4 讨论
第六章 结论
参考文献
致谢
个人简历及发表论文情况
在校期间发表论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]组织工程支架材料研究进展[J]. 焦国豪. 化工中间体. 2007(04)
[2]生物材料和再生医学的进展[J]. 孙雪,奚廷斐. 中国修复重建外科杂志. 2006(02)
[3]组织工程学的研究进展[J]. 曹谊林. 中国美容医学. 2005(02)
[4]Biocompatibility of Modified Poly-β-Hydroxybutyric Acid to Adrenocortical Cells[J]. 吴天鹏. Journal of Wuhan University of Technology-Materials Science. 2004(02)
[5]骨组织工程支架及生物材料研究[J]. 方丽茹,翁文剑,沈鸽,韩高荣,Santos JD. 生物医学工程学杂志. 2003(01)
[6]骨组织工程及可吸收高分子支架的研究进展[J]. 马朋高,游秀东,高建平,于九皋,姚康德. 化学通报. 2001(07)
[7]可生物降解的高分子类型、合成和应用[J]. 王身国. 化学通报. 1997(02)
本文编号：3183108
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/swyx/3183108.html
