去细胞猪角膜基质载体支架的制备及其在组织工程人角膜基质体外重建中的应用研究

发布时间：2021-05-24 18:24

　　人角膜基质约占全角膜厚度的90%,主要成分为人角膜基质细胞、胶原纤维及蛋白聚糖,在结构上由200-250层胶原纤维板层平行排列而成,且处于半脱水状态,在维持角膜透明及允许光线穿过中具有不可替代的作用。角膜基质缺损所致疾病具有患病率高、致盲性强和临床治疗困难等特点,在我国400余万、全世界5500余万角膜盲患者中,多数患者均为角膜基质缺损性疾病所致盲。目前,这类疾病只能通过角膜移植术来治疗,但由于捐献角膜数量的极其有限,绝大多数患者因得不到供体角膜而无法复明。体外重建的组织工程人角膜基质可以作为人角膜基质的等效替代物,使角膜基质异常性疾病的临床移植和治疗成为可能,是从根本上解决供体角膜高度匮乏问题和让众多角膜基质异常患者重见光明的唯一希望,也是决定完整组织工程人角膜能否体外重建成功的关键。为了探讨利用去细胞猪角膜基质体外重建组织工程人角膜基质的可行性,本文通过建立去细胞猪角膜基质的制备技术,并以业已建立的非转染、无致瘤性人角膜基质细胞系细胞为种子细胞、以所制备的去细胞猪角膜基质为载体支架,进行组织工程人角膜基质的体外重建研究,为利用人角膜基质细胞和去细胞猪角膜基质规模化体外重建组织工程人... 

【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 组织工程角膜
    2 TE-HCS 的研究现状
第二章 猪角膜的取材以及去细胞猪角膜基质的制备
    1 实验用品
        1.1 材料
        1.2 主要实验仪器
        1.3 实验耗材及试剂
        1.4 主要试剂配方
    2 实验方法
        2.1 猪角膜基质的取材以及去细胞猪角膜基质的制备
        2.2 石蜡切片
        2.3 HE 染色
        2.4 扫描电镜观察
    3 实验结果
        3.1 经冻干处理后去细胞猪角膜基质体外观察
        3.2 去细胞猪角膜基质HE 染色
        3.3 扫描电镜结果
    4 讨论
    5 本章小结
第三章 去细胞猪角膜基质与人角膜基质细胞的生物相容性研究
    1 实验用品
        1.1 材料
        1.2 主要实验仪器
        1.3 实验耗材及试剂
        1.4 主要试剂配方
    2 实验方法
        2.1 人角膜基质细胞体外培养方法
        2.2 人角膜基质细胞系细胞免疫荧光检测
        2.3 接种角膜基质细胞前去细胞猪角膜基质的处理
        2.4 以脱细胞猪角膜基质作为载体支架接种人角膜基质细胞
        2.5 石蜡切片
        2.6 HE 染色
        2.7 免疫组织化学染色
        2.8 扫描电镜观察
    3 实验结果
        3.1 人角膜基质细胞系细胞的生长特性
        3.2 人角膜基质细胞系细胞免疫荧光检测
        3.3 接种角膜基质细胞前去细胞猪角膜基质的处理结果
        3.4 接种细胞的生长特性
        3.5 组织工程人角膜基质HE 染色
        3.6 免疫组织化学染色
        3.7 重建TE-HCS 扫描电镜结果
    4 讨论
    5 本章小结
第四章 组织工程人角膜基质的体外重建及鉴定
    1 实验用品
        1.1 材料
        1.2 主要实验仪器
        1.3 实验耗材及试剂
        1.4 主要试剂配方
    2 实验方法
        2.1 接种角膜基质细胞前去细胞猪角膜基质的处理
        2.2 以脱细胞猪角膜基质作为载体支架接种人角膜基质细胞
        2.3 组织工程人角膜基质冰冻切片
        2.4 石蜡切片
        2.5 HE 染色
        2.6 扫描电镜观察
    3 实验结果
        3.1 脱细胞猪角膜基质接细胞前的处理观察
        3.2 接种细胞的生长特性
        3.3 组织工程人角膜基质冰冻切片观察
        3.4 组织工程人角膜基质HE 染色
        3.5 重建TE-HCS 扫描电镜结果
    4 讨论
    5 本章小结
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]组织工程人角膜内皮在维持新西兰兔角膜透明中的效果研究[J]. 樊廷俊,赵君,王晶,杨洪收,丛日山,杨秀霞,史伟云,王宜强.  山东大学学报(理学版). 2010(03)
[2]转谷氨酰胺酶交联胶原凝胶构建三维角膜基质[J]. 李燕,陈建苏,李晓霞,王伟.  眼科研究. 2009(10)
[3]脱细胞猪角膜基质体外支持皮肤细胞生长的实验研究[J]. 林旭初,孙涛,金岩,惠延年,孟浩.  眼科新进展. 2009(08)
[4]胶原-壳聚糖和角膜基质细胞复合膜的构建及其生物相容性[J]. 贾卉,王娇,胡源,张媛,张冰.  吉林大学学报(医学版). 2009(03)
[5]脱细胞角膜基质的制备及其超微结构[J]. 冯云,许永根,张弛,李颖,吴乐萌,王薇.  中国现代医学杂志. 2009(04)
[6]胶原-硫酸软骨素-透明质酸真皮支架材料修复兔角膜基质缺损的研究[J]. 王伟红,张米,许小林,余春艳,金岩.  组织工程与重建外科杂志. 2009(01)
[7]壳聚糖基角膜细胞载体的制备及其细胞相容性[J]. 高兴爽,刘万顺,韩宝芹,位晓娟.  生物工程学报. 2008(08)
[8]脱细胞猪角膜基质体外支持角膜上皮和基质细胞的生长(英文)[J]. 林旭初,惠延年,孟浩,张永杰,金岩.  国际眼科杂志. 2008(07)
[9]纤维蛋白胶与兔角膜3种细胞构建组织工程细胞片研究[J]. 梁晓东,陈建苏,郑佩娥,陈小琳.  中国病理生理杂志. 2008(04)
[10]角膜基质脱细胞处理与相容性实验研究[J]. 姜河,卿素珠,金岩,孟浩,张锐红,成醒民.  西安交通大学学报(医学版). 2007(06)



本文编号：3204645