C-G-Ha-HS支架协同PCA对NS/PCs分化作用研究

发布时间：2021-05-24 18:35

　　目前,采用细胞移植疗法将神经干／祖细胞（NS/PCs）移植入帕金森病（PD）受损部位可在一定程度上起到修复作用,但此方法仍存在缺陷。虽然NS/PCs具有分化成PD缺失的多巴胺（DA）能神经元潜能,但是移植后存活时间短,分化能力有限,不足以与周围组织建立功能联系,还需进一步完善。为了提高NS/PCs的存活和定向分化能力,体外构建可供NS/PCs扩增、分化的三维支架材料尤为重要。本文采用冷冻干燥法制备了不同比例壳聚糖-明胶-透明质酸-硫酸肝素（C-G-Ha-HS）复合支架,通过红外、孔径、孔隙率、吸水率、粘附率、降解性能测定,筛选出理想支架,经层粘连蛋白（LN）表面修饰,构建NS/PCs三维培养体系,同时考察了LN修饰的复合支架与NS/PCs的生物相容性及三维条件原儿茶酸（PCA）对NS/PCs定向分化的影响。傅里叶红外检测显示,所有支架交联成功,交联后支架上的酰胺基、磺酸基、酯键、酸酐能提供大量细胞粘附、迁移位点,促进NS/PCs分化；支架物理表征显示,C-G-Ha-HS复合支架孔径在120～130gm之间,孔隙率达到92%以上,具备吸水能力且易降解,更适合体外培养NS/PCs; CCK... 

【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
    1.1 帕金森病
    1.2 种子细胞-神经干/祖细胞
        1.2.1 NS/PCs的概念
        1.2.2 NS/PCs的生物学特征
        1.2.3 NS/PCs的特异性标记物
        1.2.4 NS/PCs的体外培养
        1.2.5 多巴胺与Nurr1基因
        1.2.6 NS/PCs分化的影响因素
    1.3 组织工程支架材料
        1.3.1 支架材料的特征
        1.3.2 支架材料的种类
        1.3.3 支架材料的制备方法
        1.3.4 支架材料的表面修饰
        1.3.5 组织工程支架材料的应用
    1.4 原儿茶酸
        1.4.1 原儿茶酸简介
        1.4.2 原儿茶酸的药理作用
    1.5 本文选题依据
2 NS/PCs的原代分离与体外培养
    2.1 实验材料及方法
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验药品及试剂
        2.1.3 实验仪器与装置
        2.1.4 实验溶液的配制方法
    2.2 NS/PCs的原代、传代培养及检测
        2.2.1 NS/PCs的体外获得及培养
        2.2.2 NS/PCs的传代培养
        2.2.3 NS/PCs生长曲线的测定
        2.2.4 NS/PCs免疫细胞化学鉴定
    2.3 实验结果与讨论
        2.3.1 体外培养的NS/PCs
        2.3.2 NS/PCs的生长曲线
        2.3.3 NS/PCs分化潜能鉴定
    2.4 本章小结
3 C-G-Ha-HS复合支架的制备及表面修饰
    3.1 实验材料及方法
        3.1.1 实验药品和试剂
        3.1.2 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 复合支架材料的制备
        3.2.2 复合支架的官能团测定
        3.2.3 复合支架的形貌观察
        3.2.4 复合支架孔径、孔隙率、吸水率、粘附率的测定
        3.2.5 复合支架降解能力的测定
        3.2.6 C-G-Ha-HS复合支架的表面修饰
        3.2.7 C-G-Ha-HS复合支架内的细胞分布观察
        3.2.8 统计分析
    3.3 实验结果与讨论
        3.3.1 复合支架的红外谱图
        3.3.2 复合支架的扫描电镜图片
        3.3.3 复合支架的孔径、孔隙率、吸水率、粘附率
        3.3.4 复合支架的体外降解率
        3.3.5 NS/PCs在C-G-Ha-HS复合支架内的分布情况
    3.4 本章小结
4 LN修饰的C-G-Ha-HS复合支架协同PCA对NS/PCs分化的影响
    4.1 实验材料及方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验所需仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 NS/PCs与C-G-Ha-HS复合支架的扫描电镜观察
        4.2.2 C-G-Ha-HS复合支架内NS/PCs的活力检测
        4.2.3 NS/PCs在C-G-Ha-HS复合支架内生长曲线的检测
        4.2.4 分化细胞的免疫细胞化学鉴定
        4.2.5 统计分析
    4.3 实验结果与讨论
        4.3.1 NS/PCs与C-G-Ha-HS复合支架的扫描电镜照片
        4.3.2 C-G-Ha-HS复合支架内的细胞活力
        4.3.3 C-G-Ha-HS复合支架内NS/PCs的生长曲线
        4.3.4 C-G-Ha-HS复合支架内NS/PCs的显微形态观察
        4.3.5 C-G-Ha-HS复合支架内NS/PCs的分化能力
    4.4 本章小结
结论
创新点与展望
参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]原儿茶酸调节神经干/祖细胞分化的作用研究[J]. 关水,李海华,葛丹,刘天庆,马学虎.  中国药理学通报. 2012(09)
[2]壳聚糖-明胶-透明质酸-硫酸肝素复合支架的制备及性能评价[J]. 林小敏,关水,葛丹,刘天庆,马学虎,崔占峰.  高校化学工程学报. 2012(02)
[3]Co-transplantation of macaque autologous Schwann cells and human embryonic nerve stem cells in treatment of macaque Parkinson’s disease[J]. Ying Xia,Chengchuan Jiang,Zuowei Cao,Keshan Shi,Yang Wang.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2012(01)
[4]胶原蛋白-硫酸肝素神经生物支架材料的制备[J]. 李晓龙,穆长征,马云胜.  中国组织工程研究与临床康复. 2011(12)
[5]中药制剂—肌萎灵注射液对神经干细胞的促分化作用[J]. 杨萍,王继明,应大君,宋林,李振强,吴以岭.  神经解剖学杂志. 2005(02)

硕士论文
[1]原儿茶酸对体外神经干细胞增殖和分化的影响[D]. 李海华.大连理工大学 2012
[2]神经干细胞在胶原凝胶及胶原—壳聚糖支架内的培养[D]. 陆瑞欣.大连理工大学 2009
[3]银杏内酯B对神经干细胞分化的影响及其机制研究[D]. 王永红.第三军医大学 2007



本文编号：3204660