米诺环素对成骨细胞功能的影响及载药支架制备
发布时间：2021-06-09 13:56
牙周病是一种多因素共同作用的感染性、破坏性口腔疾病,牙菌斑微生物的刺激以及机体自身的免疫炎症反应是其发生发展的关键因素。通过洁治、刮治等机械方法加上抗菌药物的辅助治疗可以有效控制感染,但是对于已破坏的牙周组织的修复再生作用仍十分有限。研制一种合适的药物剂型,既能控制病原微生物感染,又能调节宿主防御功能,阻断疾病的发展,同时还能诱导成骨细胞活性,修复骨缺损,这是牙周病学和口腔修复学研究的热点之一。电纺纤维具有较高的孔隙率和表面体积比、以及与细胞外基质类似的三维网状结构,有利于细胞的粘附和定植,是一种理想的载药支架材料。全身用药容易导致耐药和菌群失调及其他一些毒/副作用的出现,米诺环素在四环素中抗菌活性最强,越来越多的资料支持使用小剂量米诺环素治疗牙周病,但目前关于米诺环素与成骨细胞的研究相对较少,现有研究中关于有效药物浓度的研究尚无统一定论。如果米诺环素在维持有效抑菌活性的同时对成骨细胞的功能活性也有一定促进作用,对于牙周骨缺损的修复治疗效果将更加理想。本实验拟研究抑菌浓度米诺环素对体外培养成骨细胞功能活性的影响,同时运用静电纺丝技术合成载米诺环素的纤维支架材料,并对其物理化学性能进行分...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
米诺环素化学结构式Fig1.1Thechemicalstructureofminocycline
A.颅骨及骨缝 B.顶骨图 1.2 乳鼠颅顶骨解剖示意图Fig 1.2 Anatomic diagram of cranial parietal bone in newborn rats.2.3 体外培养原代成骨细胞的鉴定将生长良好的第三代成骨细胞以 2×104个/孔，接种于 24 孔板，预培养，于第 2d 加入成骨诱导培养基，体积分数为 5%CO2、37℃条件孵育，间隔 换一下培养液，并在镜下观察细胞形态和生长，在第 7d 时通过碱性磷酸酶行细胞鉴定，具体步骤如下：①按照试剂盒操作说明书配制相应体积CIP/NBT 染色工作液。②从孵育箱内取出 24 孔板，用移液枪小心吸去孔板养基，PBS 漂洗 2-3 次。③向 24 孔板加入配制的 BCIP/NBT 染色工作液，00ul 左右，以充分覆盖细胞为宜。④室温避光孵育 30min，可见孔板底部呈色。⑤用移液枪小心吸去染色液，PBS 洗涤 2 次，3-5min/次，倒置相差显
2 结果2.1 成骨细胞体外培养和鉴定倒置相差显微镜下可见：原代培养第 3d 的时候，便可以看见碎骨块周围开始有成骨细胞爬出，贴壁生长，沿着骨块边缘向外呈放射状增殖扩散（图 1.3A），5到 7d 的时候细胞数量明显增多，占整个培养瓶底的 70%-80%左右（图 1.3B），细胞形态大多呈不规则状，有多边形或三角形等，可见较多突起，细胞核多为卵圆形且位于细胞中央部位，可见 1-2 个核仁，细胞质丰富清晰。碱性磷酸酶染色结果为阳性，可以看见较多的蓝黑色颗粒沉积在细胞质和细胞核中的碱性磷酸酶活性部位（图 1.3C）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]辅用派丽奥软膏治疗慢性牙周炎临床疗效分析[J]. 汤瑞侠. 内蒙古医学杂志. 2016(07)
[2]载米诺环素纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合体的体外释放及抑菌性[J]. 高昊辰,汪沛,曹志中,葛葵葵,汪益涵,陆敏. 中国组织工程研究. 2016(08)
[3]米诺环素治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的初步研究[J]. 代吕霞,赖雁,陈登榜,刘敏,代娟. 中华临床医师杂志(电子版). 2015(05)
[4]三种异种骨材料修复牙周骨缺损的比较[J]. 董红宾,张琴,何惠宇,克依木·克里木,王欢欢. 中国组织工程研究. 2015(08)
[5]Runx2基因对骨代谢调控的研究进展[J]. 唐欢,许海甲,侯煜东,方卫军,李章华. 中国骨质疏松杂志. 2014(12)
[6]MC3T3-E1细胞在四种生物膜上粘附增殖能力的比较研究[J]. 戴沄,陈汉帮,李娜,陈刚,夏阳,章非敏. 口腔生物医学. 2014(03)
[7]盐酸米诺环素脂质体控释凝胶改善大鼠实验性牙周炎的作用评价[J]. 刘迪,杨丕山,胡德渝,刘福祥. 华西口腔医学杂志. 2013(06)
[8]米诺环素对慢性牙周炎龈沟液中MMP-2及其TIMP-2的影响及疗效观察[J]. 包柳明,叶皓玫. 放射免疫学杂志. 2013(04)
[9]米诺环素软膏治疗重度牙周炎的临床疗效观察[J]. 何萍,宋爱芬. 江苏医药. 2012(21)
[10]组织块法培养SD大鼠的成骨细胞及鉴定[J]. 李娟,申广浩,程光,罗二平,李飞江,景达,费舟,陈晓燕. 中国组织工程研究. 2012(46)
硕士论文
[1]明胶—羟基磷灰石—米诺环素抗菌纳米复合骨修复材料的仿生合成及细胞相容性研究[D]. 窦晓晨.安徽医科大学 2010
本文编号：3220706
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
米诺环素化学结构式Fig1.1Thechemicalstructureofminocycline
A.颅骨及骨缝 B.顶骨图 1.2 乳鼠颅顶骨解剖示意图Fig 1.2 Anatomic diagram of cranial parietal bone in newborn rats.2.3 体外培养原代成骨细胞的鉴定将生长良好的第三代成骨细胞以 2×104个/孔，接种于 24 孔板，预培养，于第 2d 加入成骨诱导培养基，体积分数为 5%CO2、37℃条件孵育，间隔 换一下培养液，并在镜下观察细胞形态和生长，在第 7d 时通过碱性磷酸酶行细胞鉴定，具体步骤如下：①按照试剂盒操作说明书配制相应体积CIP/NBT 染色工作液。②从孵育箱内取出 24 孔板，用移液枪小心吸去孔板养基，PBS 漂洗 2-3 次。③向 24 孔板加入配制的 BCIP/NBT 染色工作液，00ul 左右，以充分覆盖细胞为宜。④室温避光孵育 30min，可见孔板底部呈色。⑤用移液枪小心吸去染色液，PBS 洗涤 2 次，3-5min/次，倒置相差显
2 结果2.1 成骨细胞体外培养和鉴定倒置相差显微镜下可见：原代培养第 3d 的时候，便可以看见碎骨块周围开始有成骨细胞爬出，贴壁生长，沿着骨块边缘向外呈放射状增殖扩散（图 1.3A），5到 7d 的时候细胞数量明显增多，占整个培养瓶底的 70%-80%左右（图 1.3B），细胞形态大多呈不规则状，有多边形或三角形等，可见较多突起，细胞核多为卵圆形且位于细胞中央部位，可见 1-2 个核仁，细胞质丰富清晰。碱性磷酸酶染色结果为阳性，可以看见较多的蓝黑色颗粒沉积在细胞质和细胞核中的碱性磷酸酶活性部位（图 1.3C）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]辅用派丽奥软膏治疗慢性牙周炎临床疗效分析[J]. 汤瑞侠. 内蒙古医学杂志. 2016(07)
[2]载米诺环素纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合体的体外释放及抑菌性[J]. 高昊辰,汪沛,曹志中,葛葵葵,汪益涵,陆敏. 中国组织工程研究. 2016(08)
[3]米诺环素治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的初步研究[J]. 代吕霞,赖雁,陈登榜,刘敏,代娟. 中华临床医师杂志(电子版). 2015(05)
[4]三种异种骨材料修复牙周骨缺损的比较[J]. 董红宾,张琴,何惠宇,克依木·克里木,王欢欢. 中国组织工程研究. 2015(08)
[5]Runx2基因对骨代谢调控的研究进展[J]. 唐欢,许海甲,侯煜东,方卫军,李章华. 中国骨质疏松杂志. 2014(12)
[6]MC3T3-E1细胞在四种生物膜上粘附增殖能力的比较研究[J]. 戴沄,陈汉帮,李娜,陈刚,夏阳,章非敏. 口腔生物医学. 2014(03)
[7]盐酸米诺环素脂质体控释凝胶改善大鼠实验性牙周炎的作用评价[J]. 刘迪,杨丕山,胡德渝,刘福祥. 华西口腔医学杂志. 2013(06)
[8]米诺环素对慢性牙周炎龈沟液中MMP-2及其TIMP-2的影响及疗效观察[J]. 包柳明,叶皓玫. 放射免疫学杂志. 2013(04)
[9]米诺环素软膏治疗重度牙周炎的临床疗效观察[J]. 何萍,宋爱芬. 江苏医药. 2012(21)
[10]组织块法培养SD大鼠的成骨细胞及鉴定[J]. 李娟,申广浩,程光,罗二平,李飞江,景达,费舟,陈晓燕. 中国组织工程研究. 2012(46)
硕士论文
[1]明胶—羟基磷灰石—米诺环素抗菌纳米复合骨修复材料的仿生合成及细胞相容性研究[D]. 窦晓晨.安徽医科大学 2010
本文编号：3220706
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