三种去垢剂制备脱细胞肺支架效果评价及构建组织工程人工肺研究
发布时间：2021-06-20 18:50
构建组织工程肺（lung tissue engineering,LTE）首先需要获取理想的组织工程支架,通过种植宿主细胞,在生物反应器中进行培养,最后移植到宿主体内,形成一个具有气体交换功能的“人工肺”,为肺移植带来了新的方向,具有光明的前景。理想的去垢剂制备的脱细胞肺支架（decellularized lung scaffold,DLS）能够充分的去除肺内细胞,同时最大程度的保留细胞外基质（extracellular matrix,ECM）蛋白,无免疫原性,同时提供组织生长的三维（three dimensional,3D）结构,这对接下来的体外细胞培养和体内移植有着重要的意义。传统的去垢剂如脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate,SDC）和十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）,作用较强,ECM蛋白破坏严重,使ECM丧失了天然结构和功能,影响细胞化和血管化,同时呼吸膜破严重,影响气体交换。这些去垢剂可能更适于心脏和肾脏等致密器官的脱细胞,对于肺脏这种结构疏松的器官可能不太适合。新型去垢剂十二烷基醚硫酸钠（sodium lauryl ethe...
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：107 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１?Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ灌流系统实物图，由水浴箱、循环管路、保温小室、蠕动栗、压力控制??系统组成
?博士研宂生学位论文??脏呈现乳白色（图２－Ｆ）。图１－Ｇ为所有灌注完成后，制备的脱细胞肺支架，可??以看到几乎呈现白色透明状。??形态变化：新鲜肺形态饱满、结构紧密。整个脱细胞的过程中，可以看到灌??注ＳＤＳ后肺脏的形态明显膨胀，灌注核酸酶应用液后形态又骤然萎缩、体积变化??剧烈。灌注ＳＤＣ后ｌｈ－２ｈ时肺脏形态稍微膨胀，制备的脱细胞肺支架色泽不如??ＳＬＥＳ肺支架透明。灌注ＳＬＥＳ后肺脏的形态结构变化不大，制备的脱细胞肺支架??基本保持了新鲜肺的形态。（图２）??稱Ｒｎｎｒａｉ行ｅ??图２脱细胞过程实物图Ａ为新鲜肺；Ｂ为灌注去垢剂０．５ｈ；?Ｃ为灌注去垢剂ｌｈ；?Ｄ为灌注??去垢剂１．５ｈ；?Ｅ为灌注去垢剂２ｈ；?Ｆ为灌注核酸酶应用液后；Ｇ为灌注完成，制备的脱细胞??肺支架；Ｈ为灌注亚甲蓝染液后。??４．?３微循环网络检测??制备的脱细胞肺支架，继续灌注１％亚甲蓝染料后，可以看到染液在ＳＬＥＳ肺??支架内分布均匀，肺内毛细血管网络清晰可见。ＳＤＳ肺支架内的染液分布明显不??均匀
博士研宄生学位论文??Ｍａｓｓｏｎ三色染色可见三种脱细胞肺支架内蓝色的胶原纤维保留基本完整，??形态结构没有明显的差异（图３－１）。染色评分定量结果显示：ＳＤＣ肺支架＝２．?００??±０．?７１，ＳＤＳ?肺支架＝１．?８９±０．?６０，ＳＬＥＳ?肺支架＝２．?４４±０．?５３。与新鲜肺相比，ＳＤＣ、??ＳＤＳ、ＳＬＥＳ肺支架染色强度均明显降低（ｐ＜０．０１，ｐ＜０．０１，ｐ＜０．０１），组间比较??显示ＳＤＣ肺支架与ＳＤＳ肺支架，ＳＤＣ肺支架与ＳＬＥＳ肺支架均无统计学差异，ＳＬＥＳ??肺支架染色强度明显高于ＳＤＳ肺支架（ｐ＜０．?０５）。（图３－２）??ＥＶＧ染色可见ＳＤＣ肺支架及ＳＬＥＳ肺支架内蓝黑色的弹性纤维保留基本完整，??形态结构接近新鲜肺组织，ＳＤＳ肺支架内的弹性纤维含量减少，结构紊乱、肺泡??结构破坏严重（图３－１）。染色评分定量结果显示：ＳＤＣ肺支架＝１．５６?土０．５３，?ＳＤＳ??肺支架＝１．３３±０．?５０，?ＳＬＥＳ?肺支架＝２．１１±０．７８。与新鲜肺相比，ＳＤＣ、ＳＤＳ、ＳＬＥＳ??肺支架染色强度均明显降低（ｐ＜０．?０１
【参考文献】：
期刊论文
[1]灌注法大鼠全肺脏脱细胞基质支架的建立[J]. 黑飞龙,周建业,罗富良,吴蓓,陈蒙蒙,杨胜男,龙村. 北京生物医学工程. 2013 (01)
本文编号：3239738
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：107 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１?Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ灌流系统实物图，由水浴箱、循环管路、保温小室、蠕动栗、压力控制??系统组成
?博士研宂生学位论文??脏呈现乳白色（图２－Ｆ）。图１－Ｇ为所有灌注完成后，制备的脱细胞肺支架，可??以看到几乎呈现白色透明状。??形态变化：新鲜肺形态饱满、结构紧密。整个脱细胞的过程中，可以看到灌??注ＳＤＳ后肺脏的形态明显膨胀，灌注核酸酶应用液后形态又骤然萎缩、体积变化??剧烈。灌注ＳＤＣ后ｌｈ－２ｈ时肺脏形态稍微膨胀，制备的脱细胞肺支架色泽不如??ＳＬＥＳ肺支架透明。灌注ＳＬＥＳ后肺脏的形态结构变化不大，制备的脱细胞肺支架??基本保持了新鲜肺的形态。（图２）??稱Ｒｎｎｒａｉ行ｅ??图２脱细胞过程实物图Ａ为新鲜肺；Ｂ为灌注去垢剂０．５ｈ；?Ｃ为灌注去垢剂ｌｈ；?Ｄ为灌注??去垢剂１．５ｈ；?Ｅ为灌注去垢剂２ｈ；?Ｆ为灌注核酸酶应用液后；Ｇ为灌注完成，制备的脱细胞??肺支架；Ｈ为灌注亚甲蓝染液后。??４．?３微循环网络检测??制备的脱细胞肺支架，继续灌注１％亚甲蓝染料后，可以看到染液在ＳＬＥＳ肺??支架内分布均匀，肺内毛细血管网络清晰可见。ＳＤＳ肺支架内的染液分布明显不??均匀
博士研宄生学位论文??Ｍａｓｓｏｎ三色染色可见三种脱细胞肺支架内蓝色的胶原纤维保留基本完整，??形态结构没有明显的差异（图３－１）。染色评分定量结果显示：ＳＤＣ肺支架＝２．?００??±０．?７１，ＳＤＳ?肺支架＝１．?８９±０．?６０，ＳＬＥＳ?肺支架＝２．?４４±０．?５３。与新鲜肺相比，ＳＤＣ、??ＳＤＳ、ＳＬＥＳ肺支架染色强度均明显降低（ｐ＜０．０１，ｐ＜０．０１，ｐ＜０．０１），组间比较??显示ＳＤＣ肺支架与ＳＤＳ肺支架，ＳＤＣ肺支架与ＳＬＥＳ肺支架均无统计学差异，ＳＬＥＳ??肺支架染色强度明显高于ＳＤＳ肺支架（ｐ＜０．?０５）。（图３－２）??ＥＶＧ染色可见ＳＤＣ肺支架及ＳＬＥＳ肺支架内蓝黑色的弹性纤维保留基本完整，??形态结构接近新鲜肺组织，ＳＤＳ肺支架内的弹性纤维含量减少，结构紊乱、肺泡??结构破坏严重（图３－１）。染色评分定量结果显示：ＳＤＣ肺支架＝１．５６?土０．５３，?ＳＤＳ??肺支架＝１．３３±０．?５０，?ＳＬＥＳ?肺支架＝２．１１±０．７８。与新鲜肺相比，ＳＤＣ、ＳＤＳ、ＳＬＥＳ??肺支架染色强度均明显降低（ｐ＜０．?０１
【参考文献】：
期刊论文
[1]灌注法大鼠全肺脏脱细胞基质支架的建立[J]. 黑飞龙,周建业,罗富良,吴蓓,陈蒙蒙,杨胜男,龙村. 北京生物医学工程. 2013 (01)
本文编号：3239738
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