新西兰大白兔距骨软骨细胞的分离培养与鉴定
发布时间：2021-07-14 07:45
背景:课题组在前期研究的基础上,体外分离、培养及鉴定新西兰大白兔距骨软骨细胞。目的:探讨新西兰大白兔距骨软骨细胞体外分离、培养及鉴定的实验方法。方法:课题组采用单纯Ⅱ型胶原酶消化法体外分离新西兰大白兔距骨软骨细胞,进行体外培养,通过形态学观察、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学染色对软骨细胞进行鉴定。结果与结论:（1）倒置相差显微镜观察3代以内新西兰大白兔距骨软骨细胞呈多角形或三角形,核为圆形或椭圆形;（2）甲苯胺蓝染色可见新西兰大白兔距骨软骨细胞呈紫蓝色,细胞基质呈蓝色;（3）Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学染色可见新西兰大白兔距骨软骨细胞胞浆及胞膜出现棕黄色颗粒;（4）实验成功建立了新西兰大白兔距骨软骨细胞体外分离、培养及鉴定体系;实验结果提示3代以内软骨细胞生长良好,保持软骨细胞稳定的生物学特征。
【文章来源】：中国组织工程研究. 2017,21(28)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
兔原代距骨软骨细胞形态学特征(×100)
风干爬片，中性树胶封固，倒置相差显微镜观察距骨软骨细胞染色情况[21，27]。Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色：取生长状态良好的新西兰大白兔距骨软骨细胞进行细胞爬片，每张细胞爬片加50μL过氧化物酶阻断溶液，室温下孵育10min，PBS冲洗3次(3min/次)，去除PBS，加50μL正常非免疫动物血清，室温下孵育10min，去除血清，加50μL的一抗，室温下孵图1兔原代距骨软骨细胞形态学特征(×100)Figure1Morphologyoftheprimaryrabbittalarchondrocyts(x100)图注：图A为软骨细胞接种3d后；B为软骨细胞种7d后，呈“铺路石”样。图2兔传代距骨软骨细胞形态学特征(×100)Figure2Morphologyoftheculturedrabbittalarchondrocyts(x100)图注：图A为第1代距骨软骨细胞接种3d后，单层生长，彼此不相接触；图B为第1代距骨软骨细胞种7d后，互相连接成“铺路石”样。图3兔原代距骨软骨细胞吖啶橙荧光染色结果(×200)Figure3Acridineorangefluorescentstainingoftheprimaryrabbittalarchondrocyts(x200)图注：图A为软骨细胞接种3d；B为软骨细胞种7d。可见距骨软骨细胞核呈清晰绿色荧光。图4兔传代距骨软骨细胞吖啶橙荧光染色结果(×200)Figure4Acridineorangefluorescentstainingoftheculturedrabbittalarchondrocyts(x200)图注：图A第1代距骨软骨细胞接种3d后；B为第1代距骨软骨细胞种7d后。增殖速度也较原代细胞快。图5兔第1代距骨软骨细胞甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色结果(×200)Figure5ToluidinebluestainingandcollagentypeIIimmunohistochemicalstainingofthepassage1rabbittalarchondrocyts(×200)图注：图A为甲苯胺蓝染色结果证明软骨细胞合成和分泌蛋白聚糖；B为Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色结果证明细胞表达软骨细胞特征性Ⅱ型胶
PBS冲洗3次(3min/次)，去除PBS，加50μL正常非免疫动物血清，室温下孵育10min，去除血清，加50μL的一抗，室温下孵图1兔原代距骨软骨细胞形态学特征(×100)Figure1Morphologyoftheprimaryrabbittalarchondrocyts(x100)图注：图A为软骨细胞接种3d后；B为软骨细胞种7d后，呈“铺路石”样。图2兔传代距骨软骨细胞形态学特征(×100)Figure2Morphologyoftheculturedrabbittalarchondrocyts(x100)图注：图A为第1代距骨软骨细胞接种3d后，单层生长，彼此不相接触；图B为第1代距骨软骨细胞种7d后，互相连接成“铺路石”样。图3兔原代距骨软骨细胞吖啶橙荧光染色结果(×200)Figure3Acridineorangefluorescentstainingoftheprimaryrabbittalarchondrocyts(x200)图注：图A为软骨细胞接种3d；B为软骨细胞种7d。可见距骨软骨细胞核呈清晰绿色荧光。图4兔传代距骨软骨细胞吖啶橙荧光染色结果(×200)Figure4Acridineorangefluorescentstainingoftheculturedrabbittalarchondrocyts(x200)图注：图A第1代距骨软骨细胞接种3d后；B为第1代距骨软骨细胞种7d后。增殖速度也较原代细胞快。图5兔第1代距骨软骨细胞甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色结果(×200)Figure5ToluidinebluestainingandcollagentypeIIimmunohistochemicalstainingofthepassage1rabbittalarchondrocyts(×200)图注：图A为甲苯胺蓝染色结果证明软骨细胞合成和分泌蛋白聚糖；B为Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色结果证明细胞表达软骨细胞特征性Ⅱ型胶原。0.300.280.260.240.220.200.18光度值吸1234567891011121314图6兔第1代距骨软骨细胞生长曲线Figure6Growthcurveofthepassage1rabbittalarchondrocyts图注：第1代软骨细胞0-3d增殖缓慢，4-6d快速增殖并达到高?
【参考文献】：
期刊论文
[1]Current management of talar osteochondral lesions[J]. Arianna L Gianakos,Youichi Yasui,Charles P Hannon,John G Kennedy. World Journal of Orthopedics. 2017(01)
[2]距骨骨软骨损伤研究现状[J]. 王勇平,朱兆金,徐向阳. 生物骨科材料与临床研究. 2016(03)
[3]距骨骨软骨损伤手术治疗的研究进展[J]. 王双利,潘政军,江华,黄彰. 中华解剖与临床杂志. 2016 (02)
[4]踝关节镜下自体骨软骨移植术和微骨折手术治疗距骨骨软骨损伤比较[J]. 陈俊峰,张家兴,黄剑伟. 现代医院. 2016(03)
[5]兔软骨细胞的体外分离、培养及鉴定[J]. 王林林,董玉珍. 新乡医学院学报. 2015(04)
[6]兔关节软骨细胞原代培养及生物学鉴定[J]. 赵海洋,马子君,路屹,陈传好. 中国老年学杂志. 2015(04)
[7]自体骨软骨移植治疗距骨骨软骨损伤疗效分析[J]. 肖裕春,赵建国,袁涛,谢平,余斌. 实用骨科杂志. 2014(12)
[8]软骨细胞去分化研究进展[J]. 关炼雄,段莉,黄江鸿,廖福朋,王大平. 国际骨科学杂志. 2014(04)
[9]Cartilage repair techniques of the talus: An update[J]. Mike H Baums,Wolfgang Schultz,Tanja Kostuj,Hans-Michael Klinger. World Journal of Orthopedics. 2014(03)
[10]乳兔关节软骨细胞的分离、培养及生物学特性的观察[J]. 刘雷,韦庆军,陈管雄,谢伟,陈欢. 广西医科大学学报. 2014(03)
本文编号：3283726
【文章来源】：中国组织工程研究. 2017,21(28)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
兔原代距骨软骨细胞形态学特征(×100)
风干爬片，中性树胶封固，倒置相差显微镜观察距骨软骨细胞染色情况[21，27]。Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色：取生长状态良好的新西兰大白兔距骨软骨细胞进行细胞爬片，每张细胞爬片加50μL过氧化物酶阻断溶液，室温下孵育10min，PBS冲洗3次(3min/次)，去除PBS，加50μL正常非免疫动物血清，室温下孵育10min，去除血清，加50μL的一抗，室温下孵图1兔原代距骨软骨细胞形态学特征(×100)Figure1Morphologyoftheprimaryrabbittalarchondrocyts(x100)图注：图A为软骨细胞接种3d后；B为软骨细胞种7d后，呈“铺路石”样。图2兔传代距骨软骨细胞形态学特征(×100)Figure2Morphologyoftheculturedrabbittalarchondrocyts(x100)图注：图A为第1代距骨软骨细胞接种3d后，单层生长，彼此不相接触；图B为第1代距骨软骨细胞种7d后，互相连接成“铺路石”样。图3兔原代距骨软骨细胞吖啶橙荧光染色结果(×200)Figure3Acridineorangefluorescentstainingoftheprimaryrabbittalarchondrocyts(x200)图注：图A为软骨细胞接种3d；B为软骨细胞种7d。可见距骨软骨细胞核呈清晰绿色荧光。图4兔传代距骨软骨细胞吖啶橙荧光染色结果(×200)Figure4Acridineorangefluorescentstainingoftheculturedrabbittalarchondrocyts(x200)图注：图A第1代距骨软骨细胞接种3d后；B为第1代距骨软骨细胞种7d后。增殖速度也较原代细胞快。图5兔第1代距骨软骨细胞甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色结果(×200)Figure5ToluidinebluestainingandcollagentypeIIimmunohistochemicalstainingofthepassage1rabbittalarchondrocyts(×200)图注：图A为甲苯胺蓝染色结果证明软骨细胞合成和分泌蛋白聚糖；B为Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色结果证明细胞表达软骨细胞特征性Ⅱ型胶
PBS冲洗3次(3min/次)，去除PBS，加50μL正常非免疫动物血清，室温下孵育10min，去除血清，加50μL的一抗，室温下孵图1兔原代距骨软骨细胞形态学特征(×100)Figure1Morphologyoftheprimaryrabbittalarchondrocyts(x100)图注：图A为软骨细胞接种3d后；B为软骨细胞种7d后，呈“铺路石”样。图2兔传代距骨软骨细胞形态学特征(×100)Figure2Morphologyoftheculturedrabbittalarchondrocyts(x100)图注：图A为第1代距骨软骨细胞接种3d后，单层生长，彼此不相接触；图B为第1代距骨软骨细胞种7d后，互相连接成“铺路石”样。图3兔原代距骨软骨细胞吖啶橙荧光染色结果(×200)Figure3Acridineorangefluorescentstainingoftheprimaryrabbittalarchondrocyts(x200)图注：图A为软骨细胞接种3d；B为软骨细胞种7d。可见距骨软骨细胞核呈清晰绿色荧光。图4兔传代距骨软骨细胞吖啶橙荧光染色结果(×200)Figure4Acridineorangefluorescentstainingoftheculturedrabbittalarchondrocyts(x200)图注：图A第1代距骨软骨细胞接种3d后；B为第1代距骨软骨细胞种7d后。增殖速度也较原代细胞快。图5兔第1代距骨软骨细胞甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色结果(×200)Figure5ToluidinebluestainingandcollagentypeIIimmunohistochemicalstainingofthepassage1rabbittalarchondrocyts(×200)图注：图A为甲苯胺蓝染色结果证明软骨细胞合成和分泌蛋白聚糖；B为Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色结果证明细胞表达软骨细胞特征性Ⅱ型胶原。0.300.280.260.240.220.200.18光度值吸1234567891011121314图6兔第1代距骨软骨细胞生长曲线Figure6Growthcurveofthepassage1rabbittalarchondrocyts图注：第1代软骨细胞0-3d增殖缓慢，4-6d快速增殖并达到高?
【参考文献】：
期刊论文
[1]Current management of talar osteochondral lesions[J]. Arianna L Gianakos,Youichi Yasui,Charles P Hannon,John G Kennedy. World Journal of Orthopedics. 2017(01)
[2]距骨骨软骨损伤研究现状[J]. 王勇平,朱兆金,徐向阳. 生物骨科材料与临床研究. 2016(03)
[3]距骨骨软骨损伤手术治疗的研究进展[J]. 王双利,潘政军,江华,黄彰. 中华解剖与临床杂志. 2016 (02)
[4]踝关节镜下自体骨软骨移植术和微骨折手术治疗距骨骨软骨损伤比较[J]. 陈俊峰,张家兴,黄剑伟. 现代医院. 2016(03)
[5]兔软骨细胞的体外分离、培养及鉴定[J]. 王林林,董玉珍. 新乡医学院学报. 2015(04)
[6]兔关节软骨细胞原代培养及生物学鉴定[J]. 赵海洋,马子君,路屹,陈传好. 中国老年学杂志. 2015(04)
[7]自体骨软骨移植治疗距骨骨软骨损伤疗效分析[J]. 肖裕春,赵建国,袁涛,谢平,余斌. 实用骨科杂志. 2014(12)
[8]软骨细胞去分化研究进展[J]. 关炼雄,段莉,黄江鸿,廖福朋,王大平. 国际骨科学杂志. 2014(04)
[9]Cartilage repair techniques of the talus: An update[J]. Mike H Baums,Wolfgang Schultz,Tanja Kostuj,Hans-Michael Klinger. World Journal of Orthopedics. 2014(03)
[10]乳兔关节软骨细胞的分离、培养及生物学特性的观察[J]. 刘雷,韦庆军,陈管雄,谢伟,陈欢. 广西医科大学学报. 2014(03)
本文编号：3283726
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