微纳米羟基磷灰石增强型海藻酸钠/壳聚糖载药骨支架生物活性研究

发布时间：2021-07-21 00:43

　　研究目的:根据前期实验方法,在无菌环境下制备载VEGF和万古霉素的微纳米羟基磷灰石/海藻酸钠/壳聚糖可塑性微球型支架,与BMSCs共培养,进一步探究该支架对BMSCs增殖、成骨活性以及黏附性的影响,为该新型支架走进临床奠定前期基础。研究方法:1.采用全骨髓贴壁筛选法,从SD大鼠双侧股骨和胫骨分离培养出原代BMSCs,连续传代至第3代,对其进行成骨诱导,成脂诱导以及后续实验。2.按照前期实验方法,在无菌环境下制备载VEGF的海藻酸钠/壳聚糖多层缓释微球,将该微球加入载万古霉素的微纳米羟基磷灰石/海藻酸钠/壳聚糖混合基质内,构建无菌的载VEGF和万古霉素的微纳米羟基磷灰石/海藻酸钠/壳聚糖可塑性微球型支架。3.将该支架与BMSCs共培养,采用MTT法检测微纳米羟基磷灰石/海藻酸钠/壳聚糖支架对BMSCs增殖活性的影响;检测支架钙离子释放情况,成骨诱导后BMSCs茜素红染色、ALP染色和ALP活性表达程度,结合Real-time PCR检测在成骨诱导后BMSCs的ALP、BMP2、OPN和Runx2成骨相关基因转录情况,综合评价支架对BMSCs成骨活性的影响;将BMSCs接种到支架,24小时... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

茜素红染色可见钙结节

第2章BMSCs的分离、培养及鉴定12图2.1BMSCs形态（A：72h后原代细胞，B：第1代细胞，C：第3代细胞）Figure2.1MorphologyofBMSCs(A:Primarycells;B:Firstgenerationcells;C:Thirdgenerationcells)2.3.2BMSCs成骨分化成骨诱导11天后，茜素红染色可见明显钙结节，见图2.2。图2.2茜素红染色可见钙结节Figure2.2Alizarinredstainingshowedcalciumnodules2.3.3BMSCs成脂分化成脂肪诱导7天后，显微镜下可见细胞内出现微小脂滴，随着诱导时间延长，脂滴逐渐变大并融合。11天后，油红O染色可见明显脂滴，见图2.3。BAC

油红O染色可见脂滴


本文编号：3293945