hBMP2与hVEGF165双基因腺病毒载体转染BMSCs复合n-HA/PA66组织工程骨构建及检测

发布时间：2021-07-22 16:16

　　[目的]探讨腺病毒介导共表达人骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP2）和血管内皮生长因子165（vascular endothelia growth factor 165,VEGF165）载体转染兔骨髓间充质干细胞复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺66（nano-hydroxyapatite/polyamide66,n-HA/PA66）体外构建组织工程骨的可行性。[方法]采用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）,取第3代BMSCs进行细胞表型鉴定;第3代BMSCs作为细胞实验对象,实验共分2组:Ad-BMP2-VEGF165为实验组和Ad-GFP为对照组;首先用不同感染复数感染BMSCs,并进行ELISA和Western blot检测细胞h BMP2和h VEGF165的表达;其次将感染后的细胞接种到n-HA/PA66生物材料上,7 d后扫描电镜观察细胞贴附、生长状况;同时,7 d后消化收集贴附n-HA/PA66上的细胞,Western blot检测贴附生物材料细胞中... 

【文章来源】：中国矫形外科杂志. 2015,23(03)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1. 1 实验材料
        1. 1. 1 腺病毒载体
        1. 1. 2 生物支架材料
        1. 1. 3 实验动物
        1. 1. 4 试剂器材
    1. 2 方法
        1. 2. 1 BMSCs 分离培养及表型鉴定
        1. 2. 2 腺病毒感染 BMSCs
        1. 2. 3 ELISA 检测感染后 BMP2 和 VEGF165 表达
        1. 2. 4 Western Blot 检测感染中 BMP2 和 VEGF165 表达
        1. 2. 5 组织工程骨制备
        1. 2. 6 Western Blot 检测成骨相关蛋白
        1. 2. 7 碱性磷酸酶活性检测
        1. 2. 8 统计学分析
2 结果
    2. 1 细胞形态观察和表型鉴定
    2. 2 最佳 MOI 值测定
    2. 3 BMP2 与 VEGF165 蛋白表达检测
    2. 4 扫描电镜观察结果
    2. 5 Western Blot 检测成骨相关蛋白表达
    2. 6 ALP 活性测定结果
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠脊柱融合模型中BBP增强BMP-2的骨诱导作用[J]. 费志强,熊建义,陈磊,王大平,沈慧勇.  中国矫形外科杂志. 2013(03)
[2]纳米羟基磷灰石/聚酰胺66椎体支撑体在脊柱前柱手术重建中的应用[J]. 孙麟,宋跃明,刘浩,刘立岷,龚全,李涛,曾建成,孔清泉,裴福兴,屠重棋,段宏.  中国矫形外科杂志. 2011(18)
[3]纳米羟基磷灰石/聚酰胺66复合生物活性人工椎体在胸腰椎爆裂骨折中的应用[J]. 蒋电明,权正学,欧云生,倪卫东,梁熙,孟纯阳.  中华创伤杂志. 2006(12)
[4]纳米羟基磷灰石/聚酰胺66/成骨细胞/血管内皮生长因子165组织工程骨修复骨缺损再血管化与成骨活性[J]. 赵俊华,孟纯阳,蒋电明,安洪,陈国武.  中华创伤杂志. 2011 (09)



本文编号：3297474