PVA/ι-CA复合材料构建组织工程软骨的实验研究

发布时间：2021-07-24 22:52

　　目的制备PVA/ι-CA复合材料并对性能进行表征,通过ATDC-5与复合支架材料的共培养,观察ATDC-5在复合支架材料上的生物学行为。皮下植入复合支架材料,评价组织的局部反应,包括早期的炎症反应和后期的血管化,进而评价该复合材料的组织相容性及其用于构建组织工程软骨的可行性。方法1制备含不同卡拉胶（质量分数0%、5%、10%、20%、30%）的PVA/ι-CA复合膜材料和复合支架材料,并对支架材料的性能进行表征。2将HU-VEC与复合膜材料共培养,通过细胞黏附实验、细胞增殖实验、SEM观察细胞在材料上的生长及增殖状况,筛选出最优配比的复合支架材料做生物实验。3将ATDC-5接种于优选支架材料,复合培养7、14、21天,通过石蜡切片常规染色、扫描电镜、观察ATDC-5在支架材料上的黏附、增殖情况,通过甲苯胺蓝染色法、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色、免疫荧光法检测Ⅱ型胶原蛋白的表达。4将优选复合支架材料植入SD大鼠皮下,术后1、2、3、4周,通过石蜡切片常规HE染色、Masson染色、VG染色、Fli-1免疫组化及免疫荧光染色观察,评价该复合支架材料的组织相容性、血管化能力及体内降解情况。结果1... 

【文章来源】：华北理工大学河北省

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
引言
第1章 PVA/ι-CA复合材料的制备及其性能表征
    1.1 前言
    1.2 材料与方法
        1.2.1 主要仪器和实验试剂
        1.2.2 PVA/ι-CA复合材料制备及其性能表征
    1.3 结果与讨论
        1.3.1 PVA/ι-CA复合支架材料结构形貌观察
        1.3.2 PVA/ι-CA复合支架材料表征测试结果
    1.4 本章小结
第2章 PVA/ι-CA复合膜材料的生物学表征
    2.1 前言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 仪器和实验试剂
        2.2.2 MTT法检测细胞与复合膜材料的黏附
        2.2.3 MTT法验证复合膜材料的细胞相容性
        2.2.4 血管内皮细胞与复合膜材料共培养
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 复合膜材料细胞黏附实验结果
        2.3.2 MTT实验检测复合膜材料上细胞增殖情况
        2.3.3 细胞与复合膜材料共培养后扫描电镜观察
    2.4 本章小结
第3章 ATDC-5 在PVA/ι-CA复合支架材料上的生物学行为
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 主要仪器和实验试剂
        3.2.2 倒置相差显微镜观察ATDC-5 的生长状况
        3.2.3 ATDC-5 与复合支架材料共培养
        3.2.4 常规HE染色
        3.2.5 Ⅱ型胶原免疫组织化学染色
        3.2.6 免疫荧光法检测Ⅱ型胶原蛋白的表达
        3.2.7 甲苯胺蓝染色
        3.2.8 SEM检测
    3.3 结果
        3.3.1 倒置相差显微镜观察软骨细胞结果
        3.3.2 HE染色观察结果
        3.3.3 Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察结果
        3.3.4 免疫荧光法检测Ⅱ型胶原蛋白的表达
        3.3.5 甲苯胺蓝染色观察结果
        3.3.6 扫描电镜观察结果
    3.4 讨论
        3.4.1 聚乙烯醇构建复合支架材料的作用
        3.4.2 卡拉胶对于制备支架材料的影响
        3.4.3 细胞相容性评价
    3.5 本章小结
第4章 PVA/ι-CA复合支架材料动物皮下埋植实验
    4.1 前言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 主要仪器和实验试剂
        4.2.2 皮下包埋实验
        4.2.3 HE染色观察
        4.2.4 Masson染色观察
        4.2.5 VG染色观察
        4.2.6 Fli-1 免疫组织化学染色
        4.2.7 Fli-1 免疫荧光化学染色
    4.3 结果
        4.3.1 大体标本观察结果
        4.3.2 HE观察结果
        4.3.3 Masson染色观察结果
        4.3.4 VG染色观察结果
        4.3.5 Fli免疫组织化学染色观察植入材料的血管生成情况
        4.3.6 Fli免疫荧光化学染色观察植入材料的血管生成情况
        4.3.7 HE染色观察皮下包埋材料假手术组标本
        4.3.8 HE染色观察皮下包埋纱布组标本
        4.3.9 HE染色观察皮下注射LPS标本
    4.4 讨论
        4.4.1 影响复合支架材料血管化的因素
        4.4.2 机体的炎症反应
    4.5 本章小结
参考文献
第5章 综述 软骨组织工程的研究进展
    5.1 课题的背景和意义
    5.2 关节软骨的结构与性能
        5.2.1 关节软骨的结构
        5.2.2 关节软骨的组成
        5.2.3 关节软骨修复
    5.3 软骨组织工程
        5.3.1 种子细胞
        5.3.2 生长因子
        5.3.3 支架材料
    5.4 聚乙烯醇水凝胶材料
    5.5 本课题的研究意义和研究内容
    参考文献
结论
致谢
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作者简介
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【参考文献】：
期刊论文
[1]Adsorptive removal of iron and manganese ions from aqueous solutions with microporous chitosan/polyethylene glycol blend membrane[J]. Neama A.Reiad,Omar E.Abdel Salam,Ehab F.Abadir,Farid A.Harraz.  Journal of Environmental Sciences. 2012(08)
[2]壳聚糖-明胶-卡拉胶支架复合人牙龈成纤维细胞的体外研究[J]. 孙路,杨伯光,王永兰,姚芳莲.  牙体牙髓牙周病学杂志. 2012(06)
[3]新型软骨脱细胞基质海绵的制备及生物相容性评价[J]. 刘天军,谭波,罗静聪,邓力,解慧琪.  中国修复重建外科杂志. 2009(08)
[4]组织工程骨血管化的研究进展[J]. 何清义,李强,温立升,许建中.  中国矫形外科杂志. 2005(19)
[5]天然生物衍生支架材料在骨组织工程中的应用进展[J]. 翦新春,成洪泉,许春姣.  口腔颌面外科杂志. 2003(03)



本文编号：3301590