再细胞化的人源脱细胞动脉基质修复猪胆道节段性缺损的实验研究
发布时间：2021-08-07 20:21
[目的]表面活性剂与0.25%胰酶共同作用制备脱细胞动脉基质。将通过GFP+慢病毒标记猪的胆管上皮细胞与脱细胞动脉基质共同培养后使脱细胞动脉基质的再细胞化,为后续试验奠定材料基础。[方法]使用GFP+慢病毒标记猪胆管上皮细胞,并用CCK-8法检测细胞生长情况。采用标记的猪胆管上皮细胞与人源脱细胞基质复合培养,制备制备再细胞化的脱细胞动脉基质,利用HE染色、冰冻切片、扫描电镜、CK-19免疫荧光染色以及DAPI染色观察胆管细胞与脱细胞动脉基质的复合生长情况。[结果]GFP+慢病毒标记的胆管上皮细胞与未标记的对照组相比,细胞增殖情况以及细胞的生长速度未见明显统计学差异。在本论文中,我们观察到标记GFP+的猪胆管上皮细胞呈持续性生长,在观察周期中其生长曲线表现为逐渐升高,未观察到“S”形生长曲线,这与细胞培养过程中的直接观察结果相一致。HE染色、冰冻切片、扫描电镜、CK-19免疫荧光染色以及DAPI染色提示:人源动脉脱细胞基质与猪胆管上皮细胞的复合培养自第1周到第4周,人源动脉脱细胞基质上猪胆管上皮细胞逐渐增多,并逐渐融合连接成片状。部分形成腺体样结构。[结论]慢病毒标记的胆管上皮细胞与空白...
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【图文】：
图３倒置相差显微镜下的猪胆管上皮细胞（Ａ）；荧光显微镜观察转染后的猪??
态未见明显改变（图３Ｂ）。ＣＣＫ８结果显示转染后的猪胆管上皮细胞与原始细??胞相比细胞增殖曲线无明显变化（图４）。??，ｒ??ｆ?？＇??１?麗＾丄ｗ‘，、ｒ?＇??ｃ．ｉ?－??｝？?—?—?—???ｎ?＊?＼??＾ＴｔａｇｆＴ?ｊｌｒ???—?ｒ?ｉ？ｍｔｉ?■?ｉｎ?ｉ?Ｍ?ｉｍｉｉ?１１?■Ｒｉｊ＇?Ｔ＇－＇?■?？？？??图２进行慢病毒转染猪胆管细胞实验??图３倒置相差显微镜下的猪胆管上皮细胞（Ａ）；荧光显微镜观察转染后的猪??胆管上皮细胞可见绿色荧光表达（Ｂ）?（４０ｘ）。??１８??
３－??＋空白组??■■？转染组?ｊ??Ｉ：??〇?Ｉ?１?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ??０?１?２?３?４?５?６??图４两组细胞增殖和生长无明显差异，细胞生长持续。生长曲线呈逐渐增大的??趋势，经过一段时间后，生长曲线没有出现“ｓ”形。??３人源动脉脱细胞基质与猪胆管上皮细胞的复合培养??３．１?ＨＥ染色光镜下观察结果??将猪胆管上皮细胞与脱细胞动脉基质复合培养（图５）。复合培养１周后，??可见脱细胞动脉基质表面零星几个细胞存在，未融合成片状，未见腺体样结构??（图６Ａ）。复合培养２周后，可见细胞结构逐渐增多，位于脱细胞动脉基质表??层，但是仍未融合成片状（图６Ｂ）。复合培养后３周后，可见成片状融合的猪??胆管上皮细胞，未见腺体样结构形成（图６Ｃ）。复合培养后４周后，可见更多??融合成片的猪胆管上皮细胞，其中部分己融合形成腺体样结构（图６Ｄ）。??園??图５种植猪胆管上皮细胞后的脱细胞动脉基质??１９??
【参考文献】：
期刊论文
[1]TGF-β1中和抗体对TNBS慢性结肠炎动物模型纤维化的影响[J]. 戴萌,金雷,徐维田,熊毅敏,王一鸣,郑国荣. 世界华人消化杂志. 2017(09)
[2]Repair of a common bile duct defect with a decellularized ureteral graft[J]. Yao Cheng,Xian-Ze Xiong,Rong-Xing Zhou,Yi-Lei Deng,Yan-Wen Jin,Jiong Lu,Fu-Yu Li,Nan-Sheng Cheng. World Journal of Gastroenterology. 2016(48)
[3]良性胆管狭窄形成机制的研究进展[J]. 黄峻松,李光早. 东南国防医药. 2013(02)
[4]Repair of bile duct defect with degradable stent and autologous tissue in a porcine model[J]. Yue-Long Liang, Yi-Chen Yu, Kun Liu, Wei-Jia Wang, Jiang-Bo Ying, Yi-Fan Wang, Xiu-Jun Cai, Second Department of General Surgery, Sir Run Run Shaw Hospital, Zhejiang University, Hangzhou 310016, Zhejiang Province, China , Institute of Minimally Invasive Surgery, Zhejiang University, Hangzhou 310016, Zhejiang Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2012(37)
[5]Long-term results of choledochoduodenostomy in benign biliary obstruction[J]. Ajaz A Malik,Shiraz A Rather,Shams UL Bari,Khursheed Alam Wani. World Journal of Gastrointestinal Surgery. 2012(02)
[6]不同方法制备脱细胞血管基质的比较[J]. 陈晓波,吴英锋,段红永,武欣,陈兵,张淑文,谷涌泉,汪忠镐. 中华临床医师杂志(电子版). 2011(20)
[7]PTEN抑制增生性瘢痕成纤维细胞转分化作用及其机制[J]. 郭亮,毕胜,王珍祥,陈亮,李喆,黄书鹏,李世荣. 第三军医大学学报. 2011(02)
[8]细胞因子PDGF和CTGF对炎性疤痕狭窄形成的研究进展[J]. 周进军,陶斯斌,叶和军,孙一洪. 实用中西医结合临床. 2011(01)
[9]TGF-β1在大鼠胆管损伤修复过程中的表达[J]. 王国辉,蒋桂星,崔云甫,胡占良. 世界华人消化杂志. 2010(05)
[10]胆管上皮细胞分泌的VEGF-A在热缺血再灌注损伤后胆道及其微循环再生与修复中的作用[J]. 孙强,余元龙,胡泽民,陈宏,吴爱国,朱晓峰. 肝胆胰外科杂志. 2009(04)
本文编号：3328477
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【图文】：
图３倒置相差显微镜下的猪胆管上皮细胞（Ａ）；荧光显微镜观察转染后的猪??
态未见明显改变（图３Ｂ）。ＣＣＫ８结果显示转染后的猪胆管上皮细胞与原始细??胞相比细胞增殖曲线无明显变化（图４）。??，ｒ??ｆ?？＇??１?麗＾丄ｗ‘，、ｒ?＇??ｃ．ｉ?－??｝？?—?—?—???ｎ?＊?＼??＾ＴｔａｇｆＴ?ｊｌｒ???—?ｒ?ｉ？ｍｔｉ?■?ｉｎ?ｉ?Ｍ?ｉｍｉｉ?１１?■Ｒｉｊ＇?Ｔ＇－＇?■?？？？??图２进行慢病毒转染猪胆管细胞实验??图３倒置相差显微镜下的猪胆管上皮细胞（Ａ）；荧光显微镜观察转染后的猪??胆管上皮细胞可见绿色荧光表达（Ｂ）?（４０ｘ）。??１８??
３－??＋空白组??■■？转染组?ｊ??Ｉ：??〇?Ｉ?１?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ??０?１?２?３?４?５?６??图４两组细胞增殖和生长无明显差异，细胞生长持续。生长曲线呈逐渐增大的??趋势，经过一段时间后，生长曲线没有出现“ｓ”形。??３人源动脉脱细胞基质与猪胆管上皮细胞的复合培养??３．１?ＨＥ染色光镜下观察结果??将猪胆管上皮细胞与脱细胞动脉基质复合培养（图５）。复合培养１周后，??可见脱细胞动脉基质表面零星几个细胞存在，未融合成片状，未见腺体样结构??（图６Ａ）。复合培养２周后，可见细胞结构逐渐增多，位于脱细胞动脉基质表??层，但是仍未融合成片状（图６Ｂ）。复合培养后３周后，可见成片状融合的猪??胆管上皮细胞，未见腺体样结构形成（图６Ｃ）。复合培养后４周后，可见更多??融合成片的猪胆管上皮细胞，其中部分己融合形成腺体样结构（图６Ｄ）。??園??图５种植猪胆管上皮细胞后的脱细胞动脉基质??１９??
【参考文献】：
期刊论文
[1]TGF-β1中和抗体对TNBS慢性结肠炎动物模型纤维化的影响[J]. 戴萌,金雷,徐维田,熊毅敏,王一鸣,郑国荣. 世界华人消化杂志. 2017(09)
[2]Repair of a common bile duct defect with a decellularized ureteral graft[J]. Yao Cheng,Xian-Ze Xiong,Rong-Xing Zhou,Yi-Lei Deng,Yan-Wen Jin,Jiong Lu,Fu-Yu Li,Nan-Sheng Cheng. World Journal of Gastroenterology. 2016(48)
[3]良性胆管狭窄形成机制的研究进展[J]. 黄峻松,李光早. 东南国防医药. 2013(02)
[4]Repair of bile duct defect with degradable stent and autologous tissue in a porcine model[J]. Yue-Long Liang, Yi-Chen Yu, Kun Liu, Wei-Jia Wang, Jiang-Bo Ying, Yi-Fan Wang, Xiu-Jun Cai, Second Department of General Surgery, Sir Run Run Shaw Hospital, Zhejiang University, Hangzhou 310016, Zhejiang Province, China , Institute of Minimally Invasive Surgery, Zhejiang University, Hangzhou 310016, Zhejiang Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2012(37)
[5]Long-term results of choledochoduodenostomy in benign biliary obstruction[J]. Ajaz A Malik,Shiraz A Rather,Shams UL Bari,Khursheed Alam Wani. World Journal of Gastrointestinal Surgery. 2012(02)
[6]不同方法制备脱细胞血管基质的比较[J]. 陈晓波,吴英锋,段红永,武欣,陈兵,张淑文,谷涌泉,汪忠镐. 中华临床医师杂志(电子版). 2011(20)
[7]PTEN抑制增生性瘢痕成纤维细胞转分化作用及其机制[J]. 郭亮,毕胜,王珍祥,陈亮,李喆,黄书鹏,李世荣. 第三军医大学学报. 2011(02)
[8]细胞因子PDGF和CTGF对炎性疤痕狭窄形成的研究进展[J]. 周进军,陶斯斌,叶和军,孙一洪. 实用中西医结合临床. 2011(01)
[9]TGF-β1在大鼠胆管损伤修复过程中的表达[J]. 王国辉,蒋桂星,崔云甫,胡占良. 世界华人消化杂志. 2010(05)
[10]胆管上皮细胞分泌的VEGF-A在热缺血再灌注损伤后胆道及其微循环再生与修复中的作用[J]. 孙强,余元龙,胡泽民,陈宏,吴爱国,朱晓峰. 肝胆胰外科杂志. 2009(04)
本文编号：3328477
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/swyx/3328477.html
