生物活性玻璃陶瓷涂层通过Hedgehog/Smo/Glil信号通路促进骨髓干细胞增殖的实验研究
发布时间：2021-08-09 00:54
背景:随着生物工程技术的不断发展,生物活性玻璃陶瓷在促进骨骼生长与重建方面发挥了重大作用。Hedgehog/Smo/Gli1信号通路作为骨发育及生长的重要调节信号通路,目前关于生物活性玻璃陶瓷涂层与Hedgehog/Smo/Gli1信号通路之间作用机制的研究尚少。目的:探讨生物活性玻璃陶瓷涂层通过Hedgehog/Smo/Gli1信号通路促进骨髓干细胞成骨的机制。方法:1.采用熔炉法制备生物活性玻璃陶瓷（BGC）涂层材料,利用扫描及透射电子显微镜观察涂层形态。2.提取骨髓间充质干细胞提纯并培养,接种于生物活性玻璃陶瓷（BGC）涂层上,采用免疫荧光染色检测ki-67,RT-PCR和蛋白质印迹方法检测成骨细胞特异性标记物BMP2、Osteocalcin、ALP和Runx2及Hedgehog信号通路核心转录因子Gli和Smo蛋白表达。3.使用Hedgehog信号通路拮抗剂Cyclopamine后观察Hedgehog信号通路核心转录因子Gli和Smo蛋白表达。结果:1.扫描电镜下见BGC涂层表面无裂纹,光滑均匀致密,透射电镜下见BGC涂层呈均匀细颗粒样,颗粒之间构成致密的介孔结构,相互交错呈现...
【文章来源】：延边大学吉林省 211工程院校
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２电镜下细胞形态多呈梭形，部分呈旋涡状及放射状排列（ｘｌ〇〇，ｘ４〇〇）??
通常情况下观察物体的超微结构都是通过扫描电镜和透射电镜，不同的是扫??描电镜通过二次电子和背景散射电子成像。透射电镜通过透射电子成像。在实验??中扫描电子显微镜下见ＢＧＣ涂层表面光滑无裂纹，均匀致密（图１Ａ）。透射电镜下??见ＢＧＣ涂层呈均匀细颗粒样，颗粒之间构成致密的介孔结构，相互交错呈现出蜂??窝多孔状（图１Ｂ）。扫描电子显微镜见侧面ＢＧＣ涂层介孔厚度约为３５０ｎｍ?（图１Ｃ）。??通过扫描电镜和透射电镜结构可知生物活性玻璃陶瓷涂层具有多孔样结构，利于??种子细胞生长。??漏??图１电镜下生物活性玻璃陶瓷涂层的形态及结构；Ａ为ＢＧＣ涂层表面扫描电??子显微镜图像；Ｂ为ＢＧＣ涂层介孔结构透射电镜图像；Ｃ为ＢＧＣ介孔涂层侧面透??射电镜图像??３．２骨髓间充质干细胞形态特征??由髓腔内提取的骨髓间充质干细胞，经过细胞培养箱恒温培养后骨髓间充质??干细胞在２４小时后开始贴壁，呈现出有丝分裂状态，细胞生长状态良好。继续培??养４８小时后细胞生长数量达到培养皿８０％左右，形态规则，呈均一状态，部分呈??梭形及旋涡状。??■■??图２电镜下细胞形态多呈梭形，部分呈旋涡状及放射状排列（ｘｌ〇〇，ｘ４〇〇）??１３??
白质印迹法检测成骨相关蛋白的表达??入Ｈｈ通路阻断剂Ｃｙｃ丨ｏｐａｍｉｎｅ后Ｇ丨ｉｌ、Ｓｍｏ的ｄｇｅｈｏｇ通路阻断剂Ｃｙｃｌｏｐａｍｉｎｅ后的对照组，Ｇｌ加抑制剂对照组；加入Ｈｈ通路阻断剂Ｃｙｃｌｏｐａｍｌｉｌ、Ｓｍｏ相对表达水平明显低于未加抑制剂的两种变化均呈现出时间依赖性。??＿ｃｙｃｌｏｐａｍｍｅ?ｓｍｏＯ．Ｕ?－｜?Ｉ?５．０?？４．０?－??ｊ?３．０－??２．０－??
【参考文献】：
期刊论文
[1]胚胎干细胞自我更新与诱导分化[J]. 李向东,王秀丽. 大连医科大学学报. 2017(05)
[2]不同来源间充质干细胞在膝关节软骨修复中的临床研究进展[J]. 王连,侯鹏,蒋涛,汪宗保,赵银学,吴可. 中国骨伤. 2017(06)
[3]Hedgehog信号通路调节成骨细胞RANKL表达的研究进展[J]. 吴修团,李文良,谢柳蓉,廖红兵. 中国组织工程研究. 2017(08)
[4]钛合金表面生物活性涂层及成骨效果的研究与进展[J]. 刘贯聪,李瑞延,梁豪君,秦彦国. 中国组织工程研究. 2017(06)
[5]骨组织工程的研究进展[J]. 张淦,程迅生. 安徽医学. 2016(08)
[6]成骨细胞分化及调节过程[J]. 张静如,逄丹丹,戴生明. 中华风湿病学杂志. 2016 (07)
[7]选择性激光烧结法构建纳米羟基磷灰石与聚己内酯复合材料人工骨支架[J]. 金光辉,孙晓飞,夏琰,章云童,李超,张馨文,杨巧巧,王泽坤,谢杨. 第二军医大学学报. 2015(12)
[8]骨缺损修复生物工程研究进展[J]. 郭宜姣,李文华. 中国骨质疏松杂志. 2014(08)
[9]Hedgehog信号通路的研究进展[J]. 殷和文,龙颖颖,段凤英. 实用医学杂志. 2014(02)
[10]利用聚己内酯/羟基磷灰石复合支架修复犬胸骨缺损[J]. 禤艺文,刘腾飞,李晓亮,肖燎原,徐志飞. 现代生物医学进展. 2013(22)
硕士论文
[1]镁合金表面45S5生物玻璃陶瓷涂层的制备及性能研究[D]. 窦瑛.天津大学 2012
[2]孔隙结构可控的三维多孔细胞支架研制[D]. 亓倩倩.重庆大学 2011
[3]AW生物活性玻璃陶瓷多孔支架材料制备及性能研究[D]. 肖斌.四川大学 2005
本文编号：3331027
【文章来源】：延边大学吉林省 211工程院校
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２电镜下细胞形态多呈梭形，部分呈旋涡状及放射状排列（ｘｌ〇〇，ｘ４〇〇）??
通常情况下观察物体的超微结构都是通过扫描电镜和透射电镜，不同的是扫??描电镜通过二次电子和背景散射电子成像。透射电镜通过透射电子成像。在实验??中扫描电子显微镜下见ＢＧＣ涂层表面光滑无裂纹，均匀致密（图１Ａ）。透射电镜下??见ＢＧＣ涂层呈均匀细颗粒样，颗粒之间构成致密的介孔结构，相互交错呈现出蜂??窝多孔状（图１Ｂ）。扫描电子显微镜见侧面ＢＧＣ涂层介孔厚度约为３５０ｎｍ?（图１Ｃ）。??通过扫描电镜和透射电镜结构可知生物活性玻璃陶瓷涂层具有多孔样结构，利于??种子细胞生长。??漏??图１电镜下生物活性玻璃陶瓷涂层的形态及结构；Ａ为ＢＧＣ涂层表面扫描电??子显微镜图像；Ｂ为ＢＧＣ涂层介孔结构透射电镜图像；Ｃ为ＢＧＣ介孔涂层侧面透??射电镜图像??３．２骨髓间充质干细胞形态特征??由髓腔内提取的骨髓间充质干细胞，经过细胞培养箱恒温培养后骨髓间充质??干细胞在２４小时后开始贴壁，呈现出有丝分裂状态，细胞生长状态良好。继续培??养４８小时后细胞生长数量达到培养皿８０％左右，形态规则，呈均一状态，部分呈??梭形及旋涡状。??■■??图２电镜下细胞形态多呈梭形，部分呈旋涡状及放射状排列（ｘｌ〇〇，ｘ４〇〇）??１３??
白质印迹法检测成骨相关蛋白的表达??入Ｈｈ通路阻断剂Ｃｙｃ丨ｏｐａｍｉｎｅ后Ｇ丨ｉｌ、Ｓｍｏ的ｄｇｅｈｏｇ通路阻断剂Ｃｙｃｌｏｐａｍｉｎｅ后的对照组，Ｇｌ加抑制剂对照组；加入Ｈｈ通路阻断剂Ｃｙｃｌｏｐａｍｌｉｌ、Ｓｍｏ相对表达水平明显低于未加抑制剂的两种变化均呈现出时间依赖性。??＿ｃｙｃｌｏｐａｍｍｅ?ｓｍｏＯ．Ｕ?－｜?Ｉ?５．０?？４．０?－??ｊ?３．０－??２．０－??
【参考文献】：
期刊论文
[1]胚胎干细胞自我更新与诱导分化[J]. 李向东,王秀丽. 大连医科大学学报. 2017(05)
[2]不同来源间充质干细胞在膝关节软骨修复中的临床研究进展[J]. 王连,侯鹏,蒋涛,汪宗保,赵银学,吴可. 中国骨伤. 2017(06)
[3]Hedgehog信号通路调节成骨细胞RANKL表达的研究进展[J]. 吴修团,李文良,谢柳蓉,廖红兵. 中国组织工程研究. 2017(08)
[4]钛合金表面生物活性涂层及成骨效果的研究与进展[J]. 刘贯聪,李瑞延,梁豪君,秦彦国. 中国组织工程研究. 2017(06)
[5]骨组织工程的研究进展[J]. 张淦,程迅生. 安徽医学. 2016(08)
[6]成骨细胞分化及调节过程[J]. 张静如,逄丹丹,戴生明. 中华风湿病学杂志. 2016 (07)
[7]选择性激光烧结法构建纳米羟基磷灰石与聚己内酯复合材料人工骨支架[J]. 金光辉,孙晓飞,夏琰,章云童,李超,张馨文,杨巧巧,王泽坤,谢杨. 第二军医大学学报. 2015(12)
[8]骨缺损修复生物工程研究进展[J]. 郭宜姣,李文华. 中国骨质疏松杂志. 2014(08)
[9]Hedgehog信号通路的研究进展[J]. 殷和文,龙颖颖,段凤英. 实用医学杂志. 2014(02)
[10]利用聚己内酯/羟基磷灰石复合支架修复犬胸骨缺损[J]. 禤艺文,刘腾飞,李晓亮,肖燎原,徐志飞. 现代生物医学进展. 2013(22)
硕士论文
[1]镁合金表面45S5生物玻璃陶瓷涂层的制备及性能研究[D]. 窦瑛.天津大学 2012
[2]孔隙结构可控的三维多孔细胞支架研制[D]. 亓倩倩.重庆大学 2011
[3]AW生物活性玻璃陶瓷多孔支架材料制备及性能研究[D]. 肖斌.四川大学 2005
本文编号：3331027
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