PCL/β-TCP调控巨噬细胞极化对成血管效应的影响

发布时间：2021-08-14 18:34

　　目的:探究生物可降解材料聚己内酯/β-磷酸三钙（PCL/β-TCP）通过调控巨噬细胞极化对骨组织内血管生成的作用,为其临床应用提供依据。方法:采用3D打印技术制备试样并加以表征。体内实验采用模型为SD大鼠股骨远端植入模型。双侧植入PCL/β-TCP支架后采取免疫荧光染色观察支架内部成血管标记物CD31的表达差异,并采用血管灌注方法进行血管造影,评价支架内部血管体积。采用免疫荧光染色检测炎症标记物iNOS,抑炎标记物Arg-1的表达情况。体外实验采用细胞共培养的方式检测PCL/β-TCP对巨噬细胞极化的调控作用以及免疫介导的血管形成改变。实验分为两组,空白组（Control）及PCL/β-TCP（PT5）组。将巨噬细胞系Raw264.7接种于材料表面并对其极化水平及分泌改变进行检测。通过免疫荧光染色检测M1巨噬细胞标记物iNOS、M2巨噬细胞标记物Arg-1的表达情况。通过RT-qPCR检测CCR-7,CD206,血管内皮生长因子（VEGF）,血小板源性生长因子（PDGF-BB）,肿瘤坏死因子α（TNF-α）,白细胞介素-10（IL-10）的转录情况。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测V... 

【文章来源】：现代生物医学进展. 2020,20(11)

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

体内血管形成检测

在体内实验中，免疫荧光染色结果如下所示，植入后7天，相对于空白组，支架附近炎症标记物i NOS荧光强度明显低于对照组（P<0.001），说明M1型巨噬细胞比例减少，抗炎标记物Arg-1荧光强度增强（P<0.001),M2型巨噬细胞比例增多，如图3A,B。2.4 体外PCL/β-TCP对巨噬细胞极化的影响

如图5A,RT-qPCR结果显示巨噬细胞中VEGF转录水平下调（P<0.01),PDGF-BB转录上调（P<0.001);ELISA结果显示巨噬细胞VEGF分泌水平下降（P<0.01),PDGF-BB分泌上调（P<0.01）。Transwell迁移实验如图5C,D，结果显示，在巨噬细胞分泌作用下，相同时间内，CMA+PT5培养下穿过Transwell小室的HUVECs数量明显增加（P<0.001），提示其迁移能力增强。免疫荧光染色结果如图5B,D，单位面积内成血管标记物CD31荧光强度增强，提示其表达上调，周围血管形成行为活跃（P<0.001）。图5 PCL/β-TCP通过巨噬细胞极化对血管形成效应的影响


本文编号：3342976