微流芯片表面生物改性用于重组人骨形态发生蛋白-2的检测

发布时间：2021-08-25 14:22

　　为了开发一种快速、特异、精准的基于大肠埃希菌表达系统制备的重组人骨形态发生蛋白-2（recombinant human bone morphogenetic protein-2, rhBMP-2）质量浓度检测方法,将酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）与微流控技术相结合,筛选合适的用于rhBMP-2的特异抗体,并基于调控抗体的特异性方向的策略,采用等离子体-蛋白A方法对高分子微流芯片的检测微流道孔进行修饰,以评价抗体蛋白在微流芯片表面的吸附效率以及最终的检测信号强度。结果表明:用等离子体处理微流道后,蛋白A和筛选的抗体成功包埋到微流芯片的检测孔表面。等离子体处理功率越高,抗体的吸附效果越好;当等离子体功率为100 W、处理时间为30 s时,第1抗体的吸附效果最好。改性后的微流孔可以有效地检测rhBMP-2质量浓度,在0～2 000 pg/mL范围内,rhBMP-2的质量浓度与荧光平均密度呈线性相关,而传统96孔ELISA法的线性区间范围是0～250 pg/mL。与传统ELISA法的试剂用量（600μL/样品）相比,微流芯片... 

【文章来源】：浙江大学学报(农业与生命科学版). 2020,46(04)北大核心CSCD

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【部分图文】：

高分子微流芯片表面的等离子体-蛋白A处理工艺示意图

将圆二色谱图经CDNN 2.1软件解析，得到不同厂家第1抗体的二级结构元件含量。如表1所示：润裕抗体和欣博盛抗体的结构较相似，98%以上的结构均为螺旋构型，其余为少量的β-折叠构型。其中润裕抗体的结构略复杂一些，还含有少量的正向平行构型和无规则卷曲构型。而派普泰克抗体的二级结构更为复杂，无规卷曲的成分最多，达到45.0%，其余成分则由螺旋、反向平行、正向平行和β-折叠构型构成。基于此，后续的实验和比较均选用欣博盛抗体。2.2 微流芯片表面的亲疏水特性

图3展示了采用不同等离子体功率处理后，微流芯片表面的接触角变化情况。从中可以看出：未处理的表面（CK）表现出一定的疏水性能，接触角为87°；经过等离子体处理后，材料表面接触角明显降低。功率为25 W时，材料表面表现为亲水甚至接近超亲水，接触角约为20°。随着功率的增大，材料表面的亲水性逐渐变为疏水。当功率增大到100 W时，材料表面与未处理过的表面亲水性相似。这可能是由于等离子体在材料表面除了引入亲水基团外，还会对表面进行刻蚀作用，功率越大导致刻蚀程度越高，表面越粗糙，进而使得接触角增大。2.3 第1抗体吸附情况的比较


本文编号：3362282