人脂肪间充质干细胞与京尼平交联的Ⅰ型胶原蛋白支架构建组织工程脂肪的实验研究

发布时间：2017-05-01 22:15

  本文关键词：人脂肪间充质干细胞与京尼平交联的Ⅰ型胶原蛋白支架构建组织工程脂肪的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探讨人脂肪间充质干细胞与京尼平交联的I型胶原蛋白支架材料构建组织工程脂肪的可行性。 方法：1.分离培养人脂肪间充质干细胞(hADSCs),传代培养至第3代,接种于京尼平交联的I型胶原蛋白支架材料,测定细胞粘附率；MTT法评估hADSCs在支架材料上的粘附和增殖情况,支架材料对细胞的毒性作用；光镜和电镜分别观察hADSCs在支架材料上的粘附和生长,以及细胞形态学变化,评估]DSCs与京尼平交联的I型胶原蛋白材料的生物相容性。2.体外复合培养成脂和成血管内皮细胞诱导的hADSCs.实验分为3组,A组为实验组：：ADSCs和诱导的血管内皮细胞按4：1比例接种于支架材料；B、C组为对照组,B组：单纯接种1ADSCs:C组：单纯接种诱导的血管内皮细胞。细胞接种于支架材料并成脂诱导5-7天后,对细胞—支架复合物行油红O染色,RT-PCR检测成脂特异性基因PPAR γ-2的表达,扫描电镜观察支架材料上细胞的生长及成脂情况。3.体内实验：将上述A.B.C3组细胞-支架复合物及空白支架材料(D组)分别植入雌性Wistar大鼠大鼠背部皮下。12周后,取材并观察移植物,移植物行组织形态学和扫描电镜观察,]RT-PCR检测成脂特异性基因PPAR γ-2的表达。 结果：1.hADSCs接种于支架材料后,能够迅速在材料上粘附、增殖,其平均黏附率为86.5%；光镜和扫描电镜显示hADSCs在支架材料上粘附性良好,随着时间的推移,细胞逐渐增多,可以迁移进入支架内部并均匀分布。2.体外实验：3组细胞在材料上均生长良好。RT-PCR检测到A、B两组成脂特异性基因PPAR γ-2的表达；油红O染色表明成脂诱导后,A、B两组均成功诱导生成大量成熟脂肪细胞,C组则没有脂肪细胞生成。A、B两组和C组支架材料上的脂肪细胞数量有显著差异(P0.01)。3.体内实验：A、B两组移植物油红O染色均呈阳性,HE染色显示A组成熟脂肪细胞和新生血管数量均明显多于B组,有显著差异(P0.01),C组、D组移植物内未见成熟脂肪细胞和新生血管形成；各组材料较植入时均明显降解,且A组材料较其它各组降解更为明显。 结论：1、hADSCs在京尼平交联的Ⅰ型胶原蛋白支架材料上能很好地粘附、增殖,材料对hADSCs的毒性较低,交联后的支架材料与1ADSCs具有良好的体外生物相容性。2、hADSCs成血管内皮细胞诱导分化后,和hADSCs复合接种于支架材料,在体外能成功地构建组织工程化脂肪。3、复合移植在体内更能显著促进构建组织工程化脂肪,并能促进构建物内的血管新生。
【关键词】：脂肪组织工程 京尼平 Ⅰ型胶原蛋白 人脂肪间充质干细胞 共培养 工程脂肪 血管新生
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 缩略词表10-11
• 前言11-13
• 第一部分 人脂肪间充质干细胞与京尼平交联的Ⅰ型胶原蛋白材料生物相容性的体外研究13-22
• 1. 材料和方法13-17
• 1.1 材料13-14
• 1.1.1 主要试剂和仪器14
• 1.2 实验方法14-17
• 1.2.1 hADSCs的分离、培养14-15
• 1.2.2 hADSCs的鉴定15
• 1.2.3 支架处理及观察15
• 1.2.4 支架材料孔隙率测定15-16
• 1.2.5 支架材料体外降解率测定16
• 1.2.6 光学显微镜观察细胞—支架材料复合物16
• 1.2.7 细胞在支架材料上的黏附率测定16-17
• 1.2.8 细胞在支架材料上的粘附及增值17
• 1.2.9 细胞—支架复合物扫描电镜观察17
• 2. 结果17-20
• 2.1 hADSCs的体外培养生长及形态学17
• 2.2 hADSCs的鉴定17-18
• 2.3 支架材料大体及扫描电镜观察18
• 2.4 支架材料体外降解18
• 2.5 细胞-支架复合物倒置显微镜观察18-19
• 2.6 细胞在支架材料上的粘附19
• 2.7 细胞在支架材料上的增殖19
• 2.8 扫描电镜观察复合物19-20
• 3. 讨论20-22
• 第二部分 人脂肪间充质干细胞与京尼平交联的Ⅰ型胶原蛋白体外构建组织工程化脂肪的实验研究22-29
• 1. 材料和方法22-25
• 1.1 材料22-23
• 1.1.1 主要试剂和仪器22-23
• 1.2 实验方法23-25
• 1.2.1 hADSCs的分离、培养23
• 1.2.2 hADSCs成血管内皮细胞诱导分化及鉴定23-24
• 1.2.3 支架处理24
• 1.2.4 细胞接种及诱导24
• 1.2.5 MTT法检测成脂诱导剂对内皮细胞活性的影响24
• 1.2.6 细胞—支架复合物扫描电镜观察及油红O染色24
• 1.2.7 RT-PCR检测成脂特异性基因PPARγ-2的表达24-25
• 2. 数据处理25-26
• 3. 实验结果26-27
• 3.1 hADSCs成内皮细胞诱导分化26
• 3.2 细胞在支架材料上成脂诱导26-27
• 3.2.1 成脂诱导剂对内皮细胞活性的影响26
• 3.2.2 倒置显微镜观察26
• 3.2.3 扫描电镜观察26
• 3.2.4 油红O染色26
• 3.2.5 RT-PCR26-27
• 4. 讨论27-29
• 第三部分 人脂肪间充质干细胞与京尼平交联的Ⅰ型胶原蛋白材料体内构建组织工程脂肪的研究29-35
• 1. 材料和方法29-31
• 1.1 材料29-30
• 1.1.1 主要试剂和仪器29-30
• 1.2 实验方法30-31
• 1.2.1 hADSCs的分离、培养30
• 1.2.2 hADSCs成内皮细胞诱导分化30
• 1.2.3 胶原蛋白支架的处理30
• 1.2.4 hADSCs-支架材料体外共培养30
• 1.2.5 CM-DIL标记细胞30
• 1.2.6 hADSCs-胶原蛋白支架复合物移植及观察30-31
• 1.2.7 观察移植物内脂肪样细胞数量与新生血管数量31
• 2. 数据处理31
• 3. 结果31-33
• 3.1 荧光显微镜观察细胞-支架材料复合物31
• 3.2 移植物大体观察31
• 3.3 移植物组织学观察31-32
• 3.4 移植物内脂肪细胞数量与新生血管数量32-33
• 3.5 扫描电镜观察33
• 3.6 RT-PCR33
• 4. 讨论33-35
• 结论35-36
• 参考文献36-41
• 综述41-49
• 参考文献47-49
• 在学期间的研究成果49-50
• 致谢50-51
• 附图51-67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 郝伟;胡蕴玉;姜明;吕荣;王军;赵廷宝;;基于脂肪干细胞I型胶原凝胶PLGA-β-TCP支架的新型仿生骨组织工程复合体的构建及生物学性能[J];第四军医大学学报;2008年07期

2 张云松;高建华;鲁峰;朱茗;廖云君;;I型胶原支架材料与人脂肪干细胞体外生物相容性研究[J];南方医科大学学报;2007年02期

3 陈嘉;翟羽佳;仉红刚;张静;张秋菊;修瑞娟;;人脂肪间充质干细胞在聚ε-己内酯材料上转分化为内皮细胞[J];基础医学与临床;2011年05期

4 谢德明;施云峰;;胶原支架材料的制备与表征[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);2006年03期

5 竺亚斌,高长有,王登勇;聚合物组织工程材料[J];生物医学工程学杂志;2003年02期

6 翟羽佳;仉红刚;;脂肪来源间充质干细胞体外定向诱导分化血管细胞的研究进展[J];中国生物工程杂志;2010年06期

7 刘流;王福科;赵德萍;何晓光;钟玲;代晓明;李逸松;;联合培养VECs与ADSCs与部分脱蛋白生物骨体外构建组织工程骨的实验研究[J];中国生物美容;2010年01期

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本文编号：339757