珍珠层粉复合富血小板纤维蛋白修复兔颅骨缺损的实验研究
发布时间：2021-09-23 20:21
目的:珍珠层粉（NP）是一种有机-无机天然生物材料,具有骨诱导能力及良好的生物相容性。富血小板纤维蛋白（PRF）是富含多种有利于软硬组织愈合的生长因子和血小板的一种自体移植物,被多用于颌面外科成骨研究。故本研究利用珍珠层粉复合PRF修复新西兰兔颅骨缺损的效果,以期为颌骨缺损的修复提供一种新材料和新方法。方法:本研究共分为三部分实验,第一部分:分别提取Wistar大鼠和新西兰兔足量血液离心,离心后将通过扫描电子显微镜（SEM）观察获得的PRF凝块的形貌特征。第二部分:分别将珍珠层粉水溶性有机基质（WSM）、PRF提取物（PRFe）及WSM+10%PRFe与成骨前体细胞（MC3T3-E1）共培养,通过CCK-8检测细胞增殖、粘附情况以及碱性磷酸酶（ALP）活性表达,进而检测细胞的成骨分化情况。第三部分:选择12只新西兰兔作为研究对象,制备4个直径为8mm的颅骨缺损作为颌骨缺损模型,分别植入A组实验组:珍珠层粉复合富血小板纤维蛋白（NP/PRF）;B组对照组1:单纯植入PRF;C组对照组2:单纯植入NP;D组空白组对照组:不植入任何材料。分别于4、8、12周处死动物,通过大体标本观察、Mic...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ml鼠血液离心后未见形成的PRF
兰州大学硕士研究生学位论文珍珠层粉复合富血小板纤维蛋白修复兔颅骨缺损的实验研究10图25ml兔血液离心后形成PRF2.2.3PRF的表征方法扫描电子显微镜SEM（ScanningElectronMicroscope）该实验采用SEM对PRF横断面形貌进行观察。为了在电镜下可以观察到截面的形貌，将获取的PRF纤维蛋白凝块置于六孔板，加入2.5%戊二醛固定，置于4℃冰箱过夜，弃去固定液，PBS清洗三次后以50%，60%，70%，80%，90%，100%乙醇梯度脱水，样品在每级停留15min。二氧化碳临界点干燥，用金离子溅射涂层法喷金样品1s，样品的表面微观形貌可用扫描电子显微镜观察。照片采用20kv放大倍数×1000和×6000拍摄。2.3结果与讨论结果：PRF大体观察：从离心管内取出的新鲜PRF呈圆柱状，有弹性且质韧，表面光滑。PRF的SEM扫描结果显示，在×1000倍数中观察，可观察到少量的红细胞游离在纤维网格之外，白细胞呈球形，表面不规则，血小板在纤维网格中呈聚集状态，数量最多（图3a）。可观察到线性蛋白网格多孔的立体结构形成的纤维蛋白中，较多的纤维蛋白呈现为三叉结构。在×6000倍数中可观察到成熟的纤维蛋白网状网格状结构（图3b）。
兰州大学硕士研究生学位论文珍珠层粉复合富血小板纤维蛋白修复兔颅骨缺损的实验研究11图3PRF的SEM图像（a）×1000倍（b）×6000倍讨论：近年来，PRF作为一种能够促进颌面部软硬组织再生材料，有着巨大的发展势头。PRF的制备过程与制备PRP的过程非常相似，使用效果相对较好的PRF仍然是自体血离心。临床中应用于人体的PRF来源于至少10~15ml的血容量，而在目前的所涉动物研究中，主要分为小鼠及新西兰兔，但小鼠因为自身血容量较少，在PRF的实验中分为两类，一类则是抽取大量小鼠或新西兰兔的血液，而另一类则是在伦理审核通过后，应用志愿者的供血以提取PRF。DingY等人[61]，通过抽取志愿者血液，即刻离心后将获得的PRF载入到糖尿病小鼠模型中，得出结论为对于糖尿病小鼠皮肤创口，PRF可能会通过增加血管的形成来促进其愈合。越来越多的研究采取这种办法来研究PRF的体内实验[62]。然而，使用抽取小鼠血液方法的应用越来越少，因为其存在提取量少以及无法离心出PRF等弊端。在动物模型的建立中，新西兰兔则发挥出了较大的优势，首先因新西兰兔自身血量较多，且离心及抽取方便，越来越多的研究采取新西兰兔作为模型。例如在最近的研究中，以兔作为模型，证明了L-PRF与MSCs膜片联合应用可增强成骨作用,还有学者利用自体牙移植结合PRF来治疗兔的颅骨缺损以促进形成新骨[63]，更有将纳米银与PRF结合用于兔骨缺损修复，其两种材料的联合应用效果大于单一材料的使用[64]。因此从大鼠和兔血液离心得到的PRF来看，决定本研究的实验动物为新西兰兔，作为后续实验的实验对象。通过PRF的SEM表明，PRF自身具备着大量的三维网格状结构，单独使用在骨缺损修复中，不仅有利于血运重建，而且利于细胞穿透及组织的附着。有学者研究[65]，PRF能够成功制备，需在60-90
【参考文献】：
期刊论文
[1]珍珠层粉/壳聚糖多孔支架的制备及分析测试[J]. 李婷,赵相哲,连立强,巴格那,谢富强. 材料导报. 2016(02)
[2]碱性磷酸酶在骨矿化中的研究[J]. 吕佳炜,殷红,李春风,卢开华,徐志强,樊月圆,葛长荣,贾俊静,谷大海. 黑龙江畜牧兽医. 2013(01)
[3]碱性磷酸酶在动物骨骼代谢中的研究进展[J]. 王石莹,闫素梅. 饲料博览. 2009(04)
[4]珍珠层水溶性基质对兔骨髓基质干细胞BMP-2和Cbfα1基因表达的影响[J]. 王建钧,陈建庭,杨春露. 南方医科大学学报. 2007(12)
本文编号：3406352
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ml鼠血液离心后未见形成的PRF
兰州大学硕士研究生学位论文珍珠层粉复合富血小板纤维蛋白修复兔颅骨缺损的实验研究10图25ml兔血液离心后形成PRF2.2.3PRF的表征方法扫描电子显微镜SEM（ScanningElectronMicroscope）该实验采用SEM对PRF横断面形貌进行观察。为了在电镜下可以观察到截面的形貌，将获取的PRF纤维蛋白凝块置于六孔板，加入2.5%戊二醛固定，置于4℃冰箱过夜，弃去固定液，PBS清洗三次后以50%，60%，70%，80%，90%，100%乙醇梯度脱水，样品在每级停留15min。二氧化碳临界点干燥，用金离子溅射涂层法喷金样品1s，样品的表面微观形貌可用扫描电子显微镜观察。照片采用20kv放大倍数×1000和×6000拍摄。2.3结果与讨论结果：PRF大体观察：从离心管内取出的新鲜PRF呈圆柱状，有弹性且质韧，表面光滑。PRF的SEM扫描结果显示，在×1000倍数中观察，可观察到少量的红细胞游离在纤维网格之外，白细胞呈球形，表面不规则，血小板在纤维网格中呈聚集状态，数量最多（图3a）。可观察到线性蛋白网格多孔的立体结构形成的纤维蛋白中，较多的纤维蛋白呈现为三叉结构。在×6000倍数中可观察到成熟的纤维蛋白网状网格状结构（图3b）。
兰州大学硕士研究生学位论文珍珠层粉复合富血小板纤维蛋白修复兔颅骨缺损的实验研究11图3PRF的SEM图像（a）×1000倍（b）×6000倍讨论：近年来，PRF作为一种能够促进颌面部软硬组织再生材料，有着巨大的发展势头。PRF的制备过程与制备PRP的过程非常相似，使用效果相对较好的PRF仍然是自体血离心。临床中应用于人体的PRF来源于至少10~15ml的血容量，而在目前的所涉动物研究中，主要分为小鼠及新西兰兔，但小鼠因为自身血容量较少，在PRF的实验中分为两类，一类则是抽取大量小鼠或新西兰兔的血液，而另一类则是在伦理审核通过后，应用志愿者的供血以提取PRF。DingY等人[61]，通过抽取志愿者血液，即刻离心后将获得的PRF载入到糖尿病小鼠模型中，得出结论为对于糖尿病小鼠皮肤创口，PRF可能会通过增加血管的形成来促进其愈合。越来越多的研究采取这种办法来研究PRF的体内实验[62]。然而，使用抽取小鼠血液方法的应用越来越少，因为其存在提取量少以及无法离心出PRF等弊端。在动物模型的建立中，新西兰兔则发挥出了较大的优势，首先因新西兰兔自身血量较多，且离心及抽取方便，越来越多的研究采取新西兰兔作为模型。例如在最近的研究中，以兔作为模型，证明了L-PRF与MSCs膜片联合应用可增强成骨作用,还有学者利用自体牙移植结合PRF来治疗兔的颅骨缺损以促进形成新骨[63]，更有将纳米银与PRF结合用于兔骨缺损修复，其两种材料的联合应用效果大于单一材料的使用[64]。因此从大鼠和兔血液离心得到的PRF来看，决定本研究的实验动物为新西兰兔，作为后续实验的实验对象。通过PRF的SEM表明，PRF自身具备着大量的三维网格状结构，单独使用在骨缺损修复中，不仅有利于血运重建，而且利于细胞穿透及组织的附着。有学者研究[65]，PRF能够成功制备，需在60-90
【参考文献】：
期刊论文
[1]珍珠层粉/壳聚糖多孔支架的制备及分析测试[J]. 李婷,赵相哲,连立强,巴格那,谢富强. 材料导报. 2016(02)
[2]碱性磷酸酶在骨矿化中的研究[J]. 吕佳炜,殷红,李春风,卢开华,徐志强,樊月圆,葛长荣,贾俊静,谷大海. 黑龙江畜牧兽医. 2013(01)
[3]碱性磷酸酶在动物骨骼代谢中的研究进展[J]. 王石莹,闫素梅. 饲料博览. 2009(04)
[4]珍珠层水溶性基质对兔骨髓基质干细胞BMP-2和Cbfα1基因表达的影响[J]. 王建钧,陈建庭,杨春露. 南方医科大学学报. 2007(12)
本文编号：3406352
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