骨形态发生蛋白7衍生多肽/壳聚糖/纳米羟基磷灰石/胶原复合材料修复骨缺损的实验研究

发布时间：2021-10-17 05:52

　　第一章新型骨形态发生蛋白7衍生多肽对骨髓基质干细胞生物学行为的影响目的：观察采用FMOC/tBu固相多肽合成法人工合成的新型骨形态发生蛋白7衍生多肽对骨髓基质干细胞生物学行为的影响,包括增殖、成骨分化及矿化。方法：骨形态发生蛋白7衍生多肽采用FMOC/tBu固相多肽合成法合成。大鼠骨髓基质干细胞通过原代分离培养获得,并用流式细胞仪鉴定其表面标志物CD90,CD34。将传至第3代的骨髓基质干细胞分为实验组和对照组,在实验组细胞培养基加入终质量浓度为100mg/L的骨形态发生蛋白7衍生多肽,对照组中不添加多肽。经过2,4,6,8,10d时间的培养后,对各组细胞进行MTT检测,评价骨髓基质干细胞的增殖情况；对各组细胞进行7,14,21d的培养后,采用细胞内钙含量法和碱性磷酸酶法评价各组细胞的活性及其成骨分化情况,并通过钙黄绿素染色观察各组细胞的矿化情况。结果：经FMOC/tBu固相多肽合成法和高效液相色谱法可获得纯纯度为97%的骨形态发生蛋白7衍生多肽（KQLNAISVLYFDD）。原代培养大鼠骨髓基质干细胞生长良好,通过流式细胞仪检测其细胞表面标志CD90和CD34,阳性率分别达到91.5... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

BMP-7蛋白质的晶体结构，其中红色序列为BMP-7衍生多肤的设计合成模板FigureI-1BMP-7proteincrystalstructureinwhichredsequencedesignforBMP-7derivedpeptides

3.1 BMP-7蛋白质的晶体结构及合成的BMP-7衍生多肽质谱仪和色谱仪测定其序列及纯度，结果表明BMP-7多肽的分子量1524.78m/z,纯度为 97.64% (图 1-1，图 1-2)

可见部分细胞内有f丐黄绿素沉积，发出绿色焚光(图1-7),培养14d时，细胞内妈黄绿素沉积显著增加，发出强烈的明亮绿色焚光(图1-8)；对照组诱导培养7 d时仅有个别细胞发出绿色荧光(图1-9)，培养14 d时绿色荧光仅轻微增加(图1-10)。这说明实验组骨髓基质干细胞的矿化明显强于对照组。■图1-7实验组诱导培养7d后，转黄绿素阳性细胞发出绿色突光，可见部分细胞内有甸黄绿素沉积，发出绿色突光（X200 )Figurel-7 In the experimental group BMSCs was induced for Id. The calcein positive ceilsshowed green fluorescence ( x200 )11

【参考文献】：
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本文编号：3441237