RTCA法用于医疗器械细胞毒性检测的研究

发布时间：2021-11-24 13:23

　　目的通过实时无标记细胞分析法（real time cell analysis, RTCA）与MTT法的比较研究,探讨RTCA法用于医疗器械细胞毒性常规检测的可行性。方法首先,通过筛选细胞接种密度建立基于L929细胞的RTCA细胞毒性检测方法。然后,使用不同浓度的DMSO稀释液、标准对照材料浸提液、56批真实世界的医疗器械产品,从简单到复杂分别比较RTCA法与MTT法用于细胞毒性检测结果的一致性,并且汇总多次试验的阴性对照和阳性对照结果,比较两种方法的可重复性。结果 RTCA法检测不同浓度的DMSO稀释液没有剂量效应关系,检测标准对照材料浸提液与MTT法结果完全一致并高度相关（R=0.989 8）,检测56批医疗器械产品与MTT法结果一致率为80.4%,仅中度相关（R=0.618 3）。RTCA法的可重复性不比MTT法好。结论 RTCA法能有效检测医疗器械细胞毒性,但是部分产品可能因溶出物干扰检测结果而不适用。RTCA法作为一种新型的医疗器械细胞毒性检测方法的适用性还需要进一步研究。 

【文章来源】：北京生物医学工程. 2020,39(06)

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

不同细胞接种密度的增殖曲线

一般MTT法中常用5%～20% DMSO稀释液作为细胞毒性检测的阳性对照,用于模拟材料浸提液。本文首先选用不同浓度的DMSO溶液作为模拟材料溶出物来验证RTCA法的反应性。RTCA法检测细胞毒性的反应曲线如图2所示,RTCA法和MTT法检测的细胞存活率结果如表1所示。从图2可以看出,梯度稀释的DMSO溶液的细胞毒性反应没有出现剂量效应关系,2.5%DMSO的反应曲线远高于阴性对照组,20%的曲线反而高于10%和5%的曲线。而表1的MTT法测得的结果呈现良好的剂量效应曲线。相关性分析得到Pearson相关系数R=0.521 5,仅中度相关。

标准对照材料成分明确且简单,适用于初步验证RTCA法的可行性。HDPE和ZDEC是ISO 10993-5:2009推荐的细胞毒性对照材料。因为ZDEC细胞毒性较大,直接使用浸提原液进行验证不能准确比较两种方法测试结果的差异,因此将ZDEC浸提液稀释成不同梯度(100%、50%、25%、12.5%)。RTCA法检测的细胞毒性曲线如图3所示,RTCA法和MTT法检测的细胞存活率结果如表2所示。可以看出RTCA法和MTT法对于标准材料浸提液的细胞毒性结果一致。对于阴性对照材料HDPE都得到了阴性结果,对于阳性对照材料ZDEC,100%、50%、25%稀释液都有明显细胞毒性,而12.5%稀释液没有明显毒性。相关性分析得到Pearson相关系数R=0.989 8,高度相关。

【参考文献】：
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本文编号：3516063