基于脱细胞猪角膜基质的组织工程人角膜基质的体外重建及其动物移植研究

发布时间：2022-01-16 01:07

　　角膜位于眼球的最表面，因直接与外界接触故易受到损伤或感染，一旦受到损伤和发生病变，就会引起角膜混浊，造成视力的减退甚至丧失。角膜病是我国主要的致盲病之一，仅次于白内障，我国现有角膜病盲患者近500万人，而全世界现有角膜病盲患者近6000万人，其中大部分是由于角膜基质异常而引起的，而且还在逐年递增。角膜病尤其是角膜盲不仅给患者个人带来巨大的痛苦，在生活上还需要家人等的照顾，给家庭和社会带来了巨大的经济负担。目前，治疗角膜盲的唯一有效方法就是进行角膜移植，但由于角膜供体的严重短缺，无法满足现有众多角膜病盲患者治疗的需要。近年来，角膜组织工程技术的兴起使体外重建出组织工程人角膜成为可能，而体外重建的组织工程人角膜基质，作为捐献角膜的替代物，已成为众多角膜病盲患者通过角膜移植而复明的唯一希望。组织工程人角膜基质的体外重建急需解决足量种子细胞的来源和理想生物相容性载体支架的制备问题。本实验室通过多年研究，已建立了多个非转染人角膜基质细胞系，初步成功解决了种子细胞的来源问题，并初步建立了脱细胞猪角膜基质制备的技术工艺，本文拟在已有技术工艺的基础上，通过改进和优化利用猪角膜基质制备出脱细胞猪角膜基质... 

【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 角膜与组织工程
        1.1 角膜的结构与功能
        1.2 组织工程的兴起与研究要素
    2 组织工程角膜种子细胞的研究进展
        1.1 人角膜基质细胞
        1.2 人骨髓间充质干细胞
        1.3 人脂肪源性干细胞
        1.4 人皮肤成纤维细胞
    2 组织工程角膜载体支架的研究进展
        2.1 脱细胞猪角膜基质
        2.2 胶原及其复合材料
        2.3 丝素蛋白
        2.4 壳聚糖
        2.5 纤维蛋白
        2.6 聚羟基乙酸
    3 组织工程角膜基质体外重建的研究进展
    4 本文的研究目的与意义
        4.1 研究目的
        4.2 研究意义
第二章 非转染人角膜基质细胞系的体外培养与鉴定
    1 材料用品
        1.1 材料
        1.2 主要仪器
        1.3 药品与耗材
        1.4 常用溶液配方
    2 方法
        2.1 人角膜基质细胞的复苏及体外扩增培养
            2.1.1 人角膜基质细胞的复苏
            2.1.2 人角膜基质细胞的体外培养
        2.2 人角膜基质细胞生长特性
        2.3 人角膜基质细胞染色体分析
        2.4 人角膜基质细胞免疫细胞化学检测
    3 结果
        3.1 人角膜基质细胞的细胞形态观察
        3.2 人角膜基质细胞的生长特性
        3.3 人角膜基质细胞的染色体分析
        3.4 人角膜基质细胞的免疫细胞化学检测
            3.4.1 人角膜基质细胞标志蛋白的检测
            3.4.2 人角膜基质细胞膜连接蛋白的检测
            3.4.3 人角膜基质细胞膜功能蛋白的检测
    4 讨论
    5 本章小结
第三章 脱细胞猪角膜基质载体支架的制备
    1 材料用品
        1.1 材料
        1.2 主要仪器
        1.3 药品与耗材
        1.4 常用溶液配方
    2 方法
        2.1 脱细胞猪角膜基质载体支架的制备
        2.2 石蜡切片
        2.3 HE 染色
        2.4 冰冻切片
        2.5 DAPI 染色
        2.6 透射电镜观察
        2.7 透光率
        2.8 孔隙率
        2.9 统计学分析
    3 结果
        3.1 脱细胞效果
        3.2 超微结构观察
        3.3 透明度与透光率
        3.4 孔隙率
    4 讨论
    5 本章小结
第四章 脱细胞猪角膜基质载体支架的生物相容性研究
    1 材料用品
        1.1 材料
        1.2 主要仪器
        1.3 药品与耗材
        1.4 常用溶液配方
    2 方法
        2.1 人角膜基质细胞的体外培养
        2.2 细胞毒性评价（MTT）
        2.3 注射接种
        2.4 冰冻切片免疫细胞化学检测
    3 结果
        3.1 细胞活力检测
        3.2 形态学观察
        3.3 免疫细胞化学检测
            3.3.1 人角膜基质细胞标志蛋白的检测
            3.3.2 人角膜基质细胞膜连接蛋白的检测
    4 讨论
    5 本章小结
第五章 组织工程人角膜基质的体外重建及鉴定
    1 材料用品
        1.1 材料
        1.2 主要仪器
        1.3 药品与耗材
        1.4 常用溶液配方
    2 方法
        2.1 DiI 荧光标记人角膜基质细胞后注射接种细胞
        2.2 石蜡切片
        2.3 HE 染色
        2.4 冰冻切片
        2.5 DiI 荧光观察及免疫细胞化学检测
        2.6 透射电镜观察
    3 结果
        3.1 组织工程人角膜基质的形态学观察
        3.2 组织工程人角膜基质的 DiI 荧光检测
        3.3 组织工程人角膜基质的超微结构的检测
        3.4 组织工程人角膜基质的免疫细胞化学的检测
    4 讨论
    5 本章小结
第六章 组织工程人角膜基质的新西兰兔及比格犬板层角膜移植研究
    1 材料用品
        1.1 材料
        1.2 主要仪器
        1.3 药品与耗材
        1.4 常用溶液配方
    2 方法
        2.1 前板层角膜移植术
        2.2 组织工程人角膜基质移植效果检测
            2.2.1 裂隙灯显微镜观察与照相
            2.2.2 DiI 标记荧光检测
            2.2.3 免疫细胞化学检测
            2.2.4 石蜡切片 HE 染色
            2.2.5 透射电镜观察
    3 结果
        3.1 新西兰兔术后在体检测
        3.2 新西兰兔移植眼角膜离体鉴定
            3.2.1 角膜形态结构观察
            3.2.2 DiI 标记荧光检测
            3.2.3 角膜超微结构检测
            3.2.4 角膜免疫细胞化学检测检测
                3.2.4.1 人角膜基质细胞标志蛋白的检测
                3.2.4.2 人角膜基质细胞膜连接蛋白的检测
                3.2.4.3 人角膜基质细胞功能蛋白的检测
        3.3 比格犬术后在体检测
            3.3.1 比格犬术后角膜透明度检测
            3.3.2 比格犬移植后角膜厚度检测
            3.3.3 比格犬移植后眼压检测
    4 讨论
    5 本章小结
全文总结
参考文献
致谢
个人简历
博士期间发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]Establishment of an untransfected human corneal epithelial cell line and its biocompatibility with denuded amniotic membrane[J]. Ting-Jun Fan,Bin Xu,Jun Zhao,Hong-Shou Yang,Rui-Xin Wang,Xiu-Zhong Hu Key Laboratory for Corneal Tissue Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,Shandong Province,China.  International Journal of Ophthalmology（English Edition）. 2011(03)
[2]脂肪干细胞构建组织工程化角膜基质组织[J]. 鲍慧婧,邹俊,尹烁,崔磊.  复旦学报(医学版). 2010(06)
[3]组织工程人角膜内皮在维持新西兰兔角膜透明中的效果研究[J]. 樊廷俊,赵君,王晶,杨洪收,丛日山,杨秀霞,史伟云,王宜强.  山东大学学报(理学版). 2010(03)
[4]体外重建组织工程人角膜内皮在新西兰兔角膜内皮移植中的应用[J]. 樊廷俊,赵君,王晶,丛日山,杨秀霞,史伟云,王宜强.  国际眼科杂志. 2009(12)
[5]脱细胞猪角膜基质体外支持皮肤细胞生长的实验研究[J]. 林旭初,孙涛,金岩,惠延年,孟浩.  眼科新进展. 2009(08)
[6]脱细胞猪角膜基质体外支持角膜上皮和基质细胞的生长(英文)[J]. 林旭初,惠延年,孟浩,张永杰,金岩.  国际眼科杂志. 2008(07)
[7]组织工程角膜基质的构建[J]. 洪佳旭,徐建江,崔磊,尹烁.  中国组织工程研究与临床康复. 2007(45)
[8]脱细胞猪角膜基质的基底膜在修复兔角膜损伤中的作用[J]. 林旭初,惠延年,孟浩,张勇杰,金岩.  生物医学工程与临床. 2007(04)
[9]羊膜载体培养标记兔角膜内皮细胞移植的研究[J]. 傅瑶,范先群,罗敏,陈苹.  中华眼科杂志. 2006(10)
[10]重视我国角膜病的基础研究[J]. 刘祖国,张慧.  中华眼科杂志. 2006(08)



本文编号：3591636