基于新型多功能磁性纳米材料平台高效检测C反应蛋白

发布时间：2022-01-16 06:26

　　C反应蛋白是炎症的客观制造者之一,血清中CRP的浓度在感染、组织损伤或其他炎症条件下会增加上千倍,而且CRP是心血管疾病的重要危险因素。因此,检测和控制CRP水平对临床感染性疾病和心血管疾病的治疗至关重要。目前,用于CRP测定的方法有乳胶凝集法、单项免疫扩散法、免疫比浊法、电化学发光免疫分析法、胶体金免疫层析法、酶联免疫吸附试验和时间分辨荧光免疫层析法等。这些方法存在一些缺点如耗时耗力、灵敏度低等,所以探索一种快速、简便、可靠的CRP检测方法具有重要的预防和治疗意义。本研究以生物化学、材料化学、纳米科学、有机化学、分子生物学、免疫学等知识为理论指导,基于新型多功能磁性纳米材料平台,建立了一种新型的检测方法,用于在液体中无标记特异性检测和收集急性炎症与心血管疾病标记物C反应蛋白。免疫磁珠是由磁珠表面结合免疫配基制成的,用磁性纳米材料作为固相,在其表面包裹高分子层,最后通过修饰,共价交联免疫配基形成的。本研究用活化剂EDC/NHS活化羧基磁珠表面的羧基基团,在羧基磁珠表面固定CRP抗体,制备免疫磁珠,搭建新型多功能磁性纳米材料平台,检测CRP蛋白。本研究首先研究偶联液MES的p H值、活化... 

【文章来源】：哈尔滨工业大学黑龙江省 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

C反应蛋白的X-射线晶体结构[7]

哈尔滨工业大学工程硕士学位论文-14-低成本感染性疾病诊断的关键。在本课题中，由于多功能磁性纳米材料上可以吸附大量信号标记，这将给蛋白质分析的灵敏度带来巨大提升。图1-2为本文的技术路线图，主要分为新型多功能磁性纳米材料平台制备和CRP检测方法的建立两部分。图1-2本文技术路线图

哈尔滨工业大学工程硕士学位论文-24-2.4结果讨论2.4.1偶联液的优化取4个EP管，取3mg羧基磁珠加入1.5mLEP管中后，以4种不同pH值的0.01MMES偶联液作为偶联反应体系，分别为pH=4.5、pH=5.5、pH=6.5、pH=7，活化反应时间0min，活化剂为EDC溶液，抗体加入量为50μg，以抗体加入量为0μg作为空白组，偶联反应时间为3小时，均做三次平行实验，取平均值，比较最终抗体的偶联量。通过BCA试剂盒在OD562nm下制定蛋白的标准曲线，测免疫磁珠偶联的蛋白质含量，然后算出抗体的偶联量。如图2-1所示，在同等条件下pH=6.5的MES的抗体偶联量最高，pH=7时，偶联液效果大大降低，所以选择pH=6.5的MES作为偶联液。图2-1不同pH偶联液的抗体偶联量2.4.2活化剂的优化取3个EP管，取3mg羧基磁珠加入1.5mLEP管中后，以3种不同的活化方式作为偶联反应体系，分别为无活化剂、EDC、EDC/NHS，偶联液为pH=6.5MES，

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3592115