脐带脱细胞支架培养鼠肝前体样细胞功能研究

发布时间：2022-12-10 22:58

　　目的对脐带脱细胞支架（Human Decellularized Umbilical Cord Scaffolds,dHUCs）进行制备和表征,评价三维支架上培养小鼠肝前体样细胞（Rodent hepatocyte-derived liver progenitor-like cells,rHepLPCs）功能,提供一种新型组织工程化肝脏构建的新方案。方法两步灌肝法分离小鼠原代肝细胞,体外扩增并用Dil标记。基于脐带脱细胞支架材料的三维培养下rHepLPCs,通过测定成分检测、化学染色等方法表征材料,通过定量PCR、氨清除和尿素合成等方法进行rHepLPCs-3D的功能评价。结果经过脱细胞工艺处理后,脐带生物支架材料核酸残留量为（60.20±1.42）ng/mg（干重）,核酸去除率达到90.5%,基质成分含量丰富。小鼠肝前体样细胞体外扩增效果好,部分肝脏功能基因表达下降。支架培养2周后,ALB、G6PC和CPS1肝细胞功能基因的表达水平分别上调10.1±2.3、34.4±1.3、42.0±22.0倍。在氨代谢方面,2D培养的rHepLPCs氨清除量为（5.7±0.9）mg/（dL·106细... 

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【文章目录】：
材料与方法
    一、材料与试剂
    二、实验方法
        （一）脐带脱细胞工艺处理
        （二）小鼠原代肝细胞分离
        （三）肝前体样细胞2D培养和标记
        （四）核酸、羟脯氨酸和糖胺聚糖定量分析
        （五）石蜡包埋切片和化学染色
        （六）肝前体样细胞3D培养和细胞增殖情况
        （七）荧光定量PCR
        （八）氨清除和尿素合成
        （九）统计学处理
结果
    一、脐带脱细胞材料的外观和内部结构
    二、材料的核酸残留量和细胞外基质含量情况
    三、rHepLPCs在脐带脱细胞支架上的分布和增殖情况
    四、rHepLPCs在脐带脱细胞支架上的功能基因表达和氨代谢情况
讨论



本文编号：3717673