基于量子点的单颗粒示踪技术对膜纳米管运输机制及其相关病毒侵染行为的研究
发布时间：2023-02-18 20:25
膜纳米管是近年发现的一种广泛存在于各类型动物细胞间的长程连接结构。研究发现,膜纳米管可以作为细胞间通讯、信号传导和病原体扩散的通道或“桥梁”,在生物医学研究领域引起了人们的极大关注。系统地研究膜纳米管的运输机制对诠释依赖于膜纳米管的细胞间通讯具有非常重大的意义。禽流感病毒能够造成流感疫情的周期性流行或偶尔的全球性大爆发,对公共健康是一个潜在、巨大的威胁。研究禽流感病毒的侵染机制并结合膜纳米管研究病毒的胞间传播机制,不仅有助于解释禽流感病毒的跨种属侵染行为,而且对预防和控制病毒性疾病的传播和流行有很大的帮助。这些机制的研究都迫切需要一种强有力的技术来对活细胞中的生物事件进行原位、实时地长时间监测。单颗粒示踪技术能够实时、动态、原位地示踪单个颗粒或单个分子的运动轨迹,被广泛地应用于生物医学领域。由于量子点具有荧光强度高、光稳定性好等特性,因此作为荧光标记物非常适合于长时间的单颗粒示踪。在本工作中,我们以膜纳米管和禽流感病毒为研究对象,利用基于量子点的单颗粒示踪技术研究了膜纳米管运输机制及禽流感病毒侵染行为等热点生物学问题。本论文的主要研究内容如下： (1)利用基于量子点的单颗粒示踪技术研究...
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要 Abstract 第1章 绪论
1.1 引言
1.2 单颗粒示踪技术
1.2.1 成像方法
1.2.2 数据处理
1.2.3 单颗粒示踪技术的应用
1.3 量子点的荧光性质及其应用
1.3.1 量子点的荧光性质
1.3.2 量子点在生物医学领域的应用
1.4 基于量子点的单颗粒示踪技术及其应用
1.4.1 量子点在单颗粒示踪领域的优越性
1.4.2 基于量子点的单颗粒示踪技术在生物领域的应用
1.5 本文的选题背景和研究内容
参考文献 第2章 基于量子点的单颗粒示踪技术研究癌细胞间膜纳米管的运输机制
2.1 引言
2.2 实验方法
2.2.1 试剂和仪器
2.2.2 缓冲溶液的配制
2.2.3 细胞培养及量子点标记麦胚凝集素
2.2.4 荧光标记细胞的微丝、微管结构及肌球蛋白
2.2.5 对细胞微丝、微管结构及ATP的药物抑制
2.2.6 显微注射肌球蛋白抗体
2.2.7 共聚焦显微成像
2.2.8 图像处理及数据分析
2.3 结果与讨论
2.3.1 A549细胞膜纳米管的形成及骨架组成
2.3.2 量子点标记的麦胚凝集素在膜纳米管内的运动行为
2.3.3 量子点标记的麦胚凝集素在膜纳米管内的相互作用
2.3.4 量子点标记的麦胚凝集素在膜纳米管内的运动依赖于微丝
2.3.5 量子点标记的麦胚凝集素在膜纳米管内的运动受肌球蛋白驱动
2.4 结论
参考文献 第3章 基于量子点的单颗粒示踪技术研究与膜纳米管相关的禽流感病毒侵染机制
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 试剂与仪器
3.2.2 缓冲溶液的配制及细胞培养
3.2.3 禽流感H9N2病毒的扩增
3.2.4 禽流感H9N2病毒滴度的测定
3.2.5 量子点标记禽流感H9N2病毒的包膜
3.2.6 荧光标记细胞的微丝、微管结构及病毒HA蛋白
3.2.7 共聚焦显微成像观察、图像处理及数据分析
3.3 结果与讨论
3.3.1 Vero细胞间膜纳米管的形态和骨架结构
3.3.2 禽流感H9N2病毒对Vero细胞膜纳米管的诱导效应
3.3.3 细胞膜纳米管相关的病毒侵染过程
3.3.4 病毒在细胞膜纳米管内的运动行为分析
3.4 结论
参考文献 第4章 基于单颗粒示踪技术研究禽流感病毒在人细胞内的侵染机制及其依赖膜纳米管的胞间运动行为
4.1 引言
4.2 实验部分
4.2.1 试剂和仪器
4.2.2 缓冲溶液的配制
4.2.3 MDCK细胞和HBE细胞的培养
4.2.4 H9N2禽流感病毒的扩增、病毒滴度的测定
4.2.5 量子点标记禽流感H9N2病毒的包膜
4.2.6 荧光标记细胞的微丝、微管、晚期内体及细胞核
4.2.7 对细胞微丝、微管结构的药物抑制
4.2.8 细胞上唾液酸受体的标记
4.2.9 流式细胞术检测唾液酸受体表达量
4.2.10 共聚焦显微成像观察
4.2.11 图像处理及数据分析
4.3 结果与讨论
4.3.1 禽流感H9N2病毒在HBE细胞中群体化侵染行为
4.3.2 单个禽流感H9N2病毒在细胞内侵染行为
4.3.3 唾液酸受体在两种细胞上的表达量对比
4.3.4 唾液酸受体SAα2,3Gal和SAα2,6Gal在细胞中的运动行为
4.3.5 禽流感H9N2病毒在HBE细胞间膜纳米管中的运动行为
4.6 结论
参考文献 第5章 总结与展望
参考文献 附录：攻读博士学位期间已发表及待发表的研究成果 致谢
本文编号：3745472
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要 Abstract 第1章 绪论
1.1 引言
1.2 单颗粒示踪技术
1.2.1 成像方法
1.2.2 数据处理
1.2.3 单颗粒示踪技术的应用
1.3 量子点的荧光性质及其应用
1.3.1 量子点的荧光性质
1.3.2 量子点在生物医学领域的应用
1.4 基于量子点的单颗粒示踪技术及其应用
1.4.1 量子点在单颗粒示踪领域的优越性
1.4.2 基于量子点的单颗粒示踪技术在生物领域的应用
1.5 本文的选题背景和研究内容
参考文献 第2章 基于量子点的单颗粒示踪技术研究癌细胞间膜纳米管的运输机制
2.1 引言
2.2 实验方法
2.2.1 试剂和仪器
2.2.2 缓冲溶液的配制
2.2.3 细胞培养及量子点标记麦胚凝集素
2.2.4 荧光标记细胞的微丝、微管结构及肌球蛋白
2.2.5 对细胞微丝、微管结构及ATP的药物抑制
2.2.6 显微注射肌球蛋白抗体
2.2.7 共聚焦显微成像
2.2.8 图像处理及数据分析
2.3 结果与讨论
2.3.1 A549细胞膜纳米管的形成及骨架组成
2.3.2 量子点标记的麦胚凝集素在膜纳米管内的运动行为
2.3.3 量子点标记的麦胚凝集素在膜纳米管内的相互作用
2.3.4 量子点标记的麦胚凝集素在膜纳米管内的运动依赖于微丝
2.3.5 量子点标记的麦胚凝集素在膜纳米管内的运动受肌球蛋白驱动
2.4 结论
参考文献 第3章 基于量子点的单颗粒示踪技术研究与膜纳米管相关的禽流感病毒侵染机制
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 试剂与仪器
3.2.2 缓冲溶液的配制及细胞培养
3.2.3 禽流感H9N2病毒的扩增
3.2.4 禽流感H9N2病毒滴度的测定
3.2.5 量子点标记禽流感H9N2病毒的包膜
3.2.6 荧光标记细胞的微丝、微管结构及病毒HA蛋白
3.2.7 共聚焦显微成像观察、图像处理及数据分析
3.3 结果与讨论
3.3.1 Vero细胞间膜纳米管的形态和骨架结构
3.3.2 禽流感H9N2病毒对Vero细胞膜纳米管的诱导效应
3.3.3 细胞膜纳米管相关的病毒侵染过程
3.3.4 病毒在细胞膜纳米管内的运动行为分析
3.4 结论
参考文献 第4章 基于单颗粒示踪技术研究禽流感病毒在人细胞内的侵染机制及其依赖膜纳米管的胞间运动行为
4.1 引言
4.2 实验部分
4.2.1 试剂和仪器
4.2.2 缓冲溶液的配制
4.2.3 MDCK细胞和HBE细胞的培养
4.2.4 H9N2禽流感病毒的扩增、病毒滴度的测定
4.2.5 量子点标记禽流感H9N2病毒的包膜
4.2.6 荧光标记细胞的微丝、微管、晚期内体及细胞核
4.2.7 对细胞微丝、微管结构的药物抑制
4.2.8 细胞上唾液酸受体的标记
4.2.9 流式细胞术检测唾液酸受体表达量
4.2.10 共聚焦显微成像观察
4.2.11 图像处理及数据分析
4.3 结果与讨论
4.3.1 禽流感H9N2病毒在HBE细胞中群体化侵染行为
4.3.2 单个禽流感H9N2病毒在细胞内侵染行为
4.3.3 唾液酸受体在两种细胞上的表达量对比
4.3.4 唾液酸受体SAα2,3Gal和SAα2,6Gal在细胞中的运动行为
4.3.5 禽流感H9N2病毒在HBE细胞间膜纳米管中的运动行为
4.6 结论
参考文献 第5章 总结与展望
参考文献 附录：攻读博士学位期间已发表及待发表的研究成果 致谢
本文编号：3745472
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