结核分枝杆菌蛋白Rv1872c的表达、纯化及其生物信息学分析

发布时间：2024-04-11 01:52

　　目的异源表达并纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)H37Rv的Rv1872c蛋白,探讨抗Mtb药物新型靶点。方法 PCR扩增Rv1872c编码基因,构建融合表达载体pET-Rv1872c,并转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中,加入异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。用Co2+亲和层析纯化Rv1872c融合蛋白,并对其进行生物信息学分析。结果经SDS-PAGE和Western blot分析,证明Rv1872c融合蛋白在E.coli中完全以包涵体形式表达,其亚基相对分子质量约46 200,且在变性条件下,经亲和层析获得高纯度的Rv1872c融合蛋白。生物信息学分析表明,Rv1872c为不稳定的碱性蛋白,主要二级结构元件为α-螺旋和无规则卷曲,无跨膜区,推测为外周膜蛋白,且为潜在的醌依赖型L-乳酸脱氢酶。结论通过原核表达和亲和层析,成功获得了高纯度的Rv1872c融合蛋白,为进一步功能鉴定和开发抗Mtb药物新型靶点提供了参考。

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【部分图文】：

图1Rv1872c编码基因（lldD2）扩增产物电泳图

质粒pET-Rv1872c的双酶切（NdeⅠ/XhoⅠ）产物经1%琼脂糖凝胶电泳分析，可见1275bp的目的条带，见图2。进一步对阳性克隆进行DNA序列分析，测序结果表明克隆的lldD2基因与数据库中的参考序列完全一致，表明质粒pET-Rv1872c正确成功。图2重组....

图2重组质粒pET-Rv1872c的双酶切（NdeⅠ/XhoⅠ）产物电泳图

图1Rv1872c编码基因（lldD2）扩增产物电泳图2.3表达及纯化产物的鉴定

图3表达及纯化的Rv1872c融合蛋白的SDS-PAGE分析

Westernblot分析显示，在相对分子质量约46000处可见明显的反应条带，见图4，表明纯化的重组Rv1872为带有His标签的融合蛋白。图4纯化的Rv1872c融合蛋白的Westernblot分析

图4纯化的Rv1872c融合蛋白的Westernblot分析

图3表达及纯化的Rv1872c融合蛋白的SDS-PAGE分析2.4生物信息学分析

本文编号：3950690