绝经后骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞与PLGA构建组织工程脂肪的实验研究

发布时间：2017-08-04 11:18

  本文关键词：绝经后骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞与PLGA构建组织工程脂肪的实验研究

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【摘要】：目的： 1.通过双侧卵巢摘除术构建绝经后骨质疏松动物模型，收集OVX大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）进行体外培养、扩增、成脂向诱导分化，探讨绝经后骨质疏松大鼠MSCs体外分裂增殖能力以及成脂向分化能力； 2.将成脂诱导后的MSCs与高分子生物支架材料PLGA体内构建脂肪组织工程，评价绝经后骨质疏松大鼠MSCs作为种子细胞构建脂肪组织工程的潜在应用价值； 3.证明绝经后骨质疏松症发生的相关细胞机制，为绝经后骨质疏松症患者利用自身MSCs构建组织工程脂肪提供实验基础和技术依据。 方法： 1.采用双侧卵巢摘除术建立绝经后骨质疏松动物模型，模型建立3月后，通过双能X线吸收法对其骨密度、骨矿含量进行检测； 2.取OVX大鼠双侧股骨、胫骨，采用贴壁筛选法体外分离培养MSCs，，通过不断传代进行扩增和纯化，倒置相差显微镜观察细胞形态学变化；MTT法测定细胞生长情况，绘制细胞生长曲线； 3.取OVX大鼠第3代MSCs进行成脂诱导，分别于第14天、21天倒置相差显微镜观察细胞形态学变化，并进行油红O染色鉴定； 4.取OVX大鼠成脂诱导第14天MSCs进行透射电镜观察，分析其超微结构的变化； 5.将诱导成熟成脂细胞与PLGA支架体外共培养，1周后扫描电镜观察细胞在PLGA支架材料上的粘附、生长状况； 6.将种子细胞—支架材料复合物植入裸鼠背部皮下进行异位成脂，于不同时间点（4周、8周、12周）取材，通过组织切片HE染色检测植入体周围及内部成脂情况。 结果： 1.采用双侧卵巢摘除术建模后3月，经DXA法检测其骨密度与骨矿含量均显著低于正常雌性大鼠（P0.05）； 2.选用全骨髓贴壁培养法，OVX大鼠MSCs在培养瓶中生长状态良好，可大量增殖，呈现纺锤形、梭形，细胞间相互连接； 3.MTT检测结果显示：第1天到第2天增殖速度稍为缓慢，为潜伏期；第2天至第7天，细胞增殖速度较快，呈指数增长，进入生长期；第7天至第10天细胞增殖速度变缓，细胞生长进入平台期； 4.经成脂诱导后，细胞变为圆形，胞浆内被大小不一的脂滴所占据；油红O染色，脂滴被染成深红色，呈阳性；透射电镜观察成脂诱导后OVX大鼠MSCs体积增大，呈圆形或椭圆形，胞膜边缘光滑，胞体内可见大量滑面内质网、脂滴聚集； 5.取出与PLGA材料的复合植入物，HE染色可检测出新生脂肪组织的形成。 结论： 1.经双侧卵巢摘除术后建立的骨质疏松大鼠模型中所获得的骨髓间充质干细胞(MSCs)，采用全骨髓贴壁培养法体外分离培养、纯化扩增后，生长状态良好，增殖活性高，完全可达到组织工程对种子细胞所要求的106～107数量级； 2.使用含有地塞米松、IBMX、吲哚美辛、胰岛素等诱导剂的基础培养基可完成对OVX大鼠MSCs的成脂向诱导，成脂能力确切； 3.OVX大鼠MSCs可在生物高分子材料PLGA三维空间内很好的粘附、生长，且具有较高的细胞接种率，能够完成与生物支架材料的复合共培养； 4.将细胞-支架材料复合物植入裸鼠体内，裸鼠生长状态良好，未见明显异常； 5. OVX大鼠MSCs可在生物体内继续生长、增殖，并保持其活性，成功构建出组织工程脂肪； 6.绝经后骨质疏松症大鼠所获得的MSCs体外生长、增殖、分化能力并没有减弱，具有强大的增殖、分化能力，可达到组织工程对种子细胞的基本要求。
【关键词】：绝经后骨质疏松症 骨髓间充质干细胞 脂肪细胞 SD大鼠 PLGA 组织工程脂肪
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R580;R318.08
【目录】：

• 英文缩写词表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-15
• 实验一 绝经后骨质疏松动物模型建立的实验研究15-18
• 1 材料与方法15
• 2 结果15-16
• 3 讨论16-18
• 实验二 绝经后骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养及成脂分化能力的实验研究18-26
• 1 材料与方法18-21
• 2 结果21-22
• 3 讨论22-24
• 4 附图24-26
• 实验三 绝经后骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞源性的脂肪细胞与 PLGA 构建组织工程脂肪的实验研究26-32
• 1 材料与方法26-28
• 2 结果28
• 3 讨论28-30
• 4 附图30-32
• 小结32-33
• 参考文献33-36
• 综述36-43
• 参考文献41-43
• 攻读学位期间发表文章情况43-44
• 致谢44-45
• 个人简介45

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本文编号：619260