腺病毒介导rhBMP-2转染兔BMSCs联合同种异体DBM构建复合材料的生物安全性研究

发布时间：2017-08-28 05:58

  本文关键词：腺病毒介导rhBMP-2转染兔BMSCs联合同种异体DBM构建复合材料的生物安全性研究

  更多相关文章： 骨形态发生蛋白-2 腺病毒 骨髓间充质干细胞 脱钙骨基质

【摘要】：目的腺病毒重组人骨形态发生蛋白-2(Ad-rhBMP-2)转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合同种异体脱钙骨基质构建复合材料的生物相容性观察。方法复苏保存于液氮罐中的骨髓间充质干细胞(BMSCs),取相同代数细胞运用腺病毒重组人骨形态发生蛋白-2(Ad-rhBMP-2)进行转染,进行转染后免疫组化观察转染后骨髓间充质干细胞内骨形态发生蛋白-2(BMP-2)表达情况。BMSCs转染48h后与同种异体骨脱钙骨基质复合,扫描电镜观察脱钙骨基质上细胞生长、贴附情况,MTT法检测细胞增殖情况。结果腺病毒转染48h后,BMSCs在荧光显微镜观察下,转染后的细胞状态较好,镜下可见绿色荧光表达,肉眼观察转染效率达到95%以上,免疫组化实验检测结果表明(Ad-rhBMP-2)转染后棕黄色颗粒性染色可以在细胞胞浆中观察到,呈阳性表达,未转染细胞内BMP-2蛋白含量较少。细胞复合同种异体骨脱钙骨基质体外培养48h后,倒置显微镜下可见脱钙骨基质材料具有良好孔隙与三维结构,荧光显微镜下Ad-EGFP转染细胞与脱钙骨基质复合组可观察到支架材料上细胞正常生长发出明亮绿色荧光。细胞计数法检测,细胞与脱钙骨基质复合6h后,细胞粘附率约(70±3.7)%;复合12h后粘附率为(77±4.6)%;复合24h后粘附率为(80±3.8)%。扫描电镜下观察可见脱钙骨基质呈现疏松多孔结构,孔径大小不一,形状不规则并相互交通。脱钙骨基质的孔隙直径为215±86μm,孔隙率达76±3.51%。体外培养7天后扫描电镜观察细胞与脱钙骨基质材料复合可见脱钙骨表面的细胞粘连成片,细胞布满孔隙,呈伸展状、立体状生长。MTT检测结果显示,种植于脱钙骨基质上的转染后细胞增殖情况正常,与正常转染后细胞增殖情况无明显差异(p0.05)。结论同种异体脱钙骨基质具有良好的三维立体结构。Ad-rhBMP-2能够对BMSCs成功、高效的转染。Ad-BMP-2转染骨髓间充质干细胞与同种异体骨脱钙骨基质的生物相容性良好。
【关键词】：骨形态发生蛋白-2 腺病毒 骨髓间充质干细胞 脱钙骨基质
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R68;R318.08
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 英汉缩略词对照表9-10
• 前言10-12
• 1 材料与方法12-21
• 1.1 实验材料与仪器12
• 1.2 主要实验试剂12-13
• 1.3 主要实验仪器13-14
• 1.4 实验方法14-21
• 2 结果21-25
• 2.1 兔BMSCs生长情况21
• 2.2 Ad-EGFP转染效率的检测21
• 2.3 免疫组化法检测BMP-2 的表达21-22
• 2.4 BMSCs复合DBM植骨材料观察22-23
• 2.5 细胞复合DBM黏附率的测定23
• 2.6 扫描电镜观察23-24
• 2.7 MTT分析DBM对BMSCs存活及增殖的影响24-25
• 3 讨论25-33
• 3.1 BMSCs的分离和培养25-27
• 3.2 腺病毒介导BMP-2 转染BMSCs27-29
• 3.3 腺病毒介导BMP-2 转染BMSCs同DBM复合29-31
• 3.4 生物相容性初步观察31-33
• 4 结论33-34
• 4.1 同种异体脱钙骨基质具有良好的三维结构33
• 4.2 Ad-rhBMP-2 能够对BMSCs成功、高效的转染33
• 4.3 Ad-rhBMP-2 转染BMSCs联合同种异体DBM构建复合材料的生物相容性良好33-34
• 参考文献34-38
• 综述38-52
• 参考文献47-52
• 攻读学位期间发表的学术论文目录52-53
• 致谢53

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本文编号：747332