Sonic hedgehog信号调控BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化

发布时间：2017-09-03 11:35

  本文关键词：Sonic hedgehog信号调控BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化

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【摘要】：目的：分析Sonic hedgehog (Shh)信号对骨形态发生蛋白9 (Bone Morphogenetic Proteins 9, BMP9)调控的间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells, MSCs)骨向分化的影响,并探究这种作用的调控机制。方法：BMP9处理MSCs,1、3、5d后,RT-PCR和Western Blot检测Hedgehog (Hh)信号相关分子的表达。紧接着,用cyclopamine(Hh信号抑制剂)和purmorphamine(Hh信号激活剂)分别作用于BMP9处理的MSCs,化学发光检测早期成骨标志物碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红S染色检测晚期的钙盐沉积。包装腺病毒Ad-Shh(过表达Shh)和Ad-siShh(干扰Shh),RT-PCR和Western Blot分析病毒效果。随后分别检测Ad-Shh和Ad-siShh对BMP9调控的MSCs骨向分化的作用：化学发光和细胞化学染色检测ALP变化；茜素红S染色检测钙盐沉积；RT-PCR和Western Blot检测晚期成骨标志物骨桥蛋白(Osteopontin, OPN)和骨钙素(Osteocalcin, OCN)以及BMP9下游成骨相关基因Dlx5、Runx2、Id1、Id2、Id3、CTGF和Coll的表达；Micro-CT以及组织细胞染色(HE、Masson三色和阿辛蓝)观察Ad-Shh对BMP9引起的裸鼠皮下异位成骨的影响。荧光素酶报告基因实验检测Ad-Shh对BMP9诱导的Smad1/5/8转录调控活性的影响；Western Blot检测Ad-Shh对BMP9诱导的Smad1/5/8、MAPK磷酸化以及总的Smad1/5/8和磷酸化Smad1/5/8核内聚集的影响。结果：BMP9可影响Hh信号相关基因的表达；抑制或激活Hh信号可减弱或增强BMP9所导致的MSCs向成骨细胞分化。Ad-Shh增强了BMP9诱导的体外骨向分化过程,促进了BMP9诱导的体内成骨包块形成;相反,Ad-siShh减弱了BMP9诱导的体外骨向分化过程。Ad-Shh增强了BMP9诱导的Smad1/5/8的转录调控活性,并促进了磷酸化Smad1/5/8的核内堆积。结论：Shh信号可调控BMP9诱导的MSCs成骨分化。
【关键词】：Sonic hedgehog信号 骨形态发生蛋白9 间充质干细胞 成骨分化
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-16
• 技术路线15-16
• 1 材料和方法16-25
• 2 结果25-41
• 3 讨论41-45
• 全文总结45-46
• 参考文献46-51
• 文献综述51-59
• 参考文献55-59
• 致谢59-60
• 攻读硕士期间发表的学术论文60

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本文编号：784787