组织工程动态培养法促进大鼠脂肪间充质干细胞在冻干骨支架上的粘附实验研究

发布时间：2017-09-14 11:05

  本文关键词：组织工程动态培养法促进大鼠脂肪间充质干细胞在冻干骨支架上的粘附实验研究

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【摘要】：目的 采用两种不同的培养方法：静态和动态培养法观察脂肪间充质干细胞在冻干骨支架上的粘附作用，为骨缺损修复领域提供实验数据和理论依据。 方法 用酶消化法分离纯化SD大鼠AD-MSCs，取传至第3代的AD-MSCs，检测表面抗原CD31、CD44、CD49d、CD106的表达情况，MTT法检测增殖活性。取新鲜牛松质骨，切成45mm3左右的小块，脱脂，脱水，冷冻，干燥，制成FDB，灭菌备用。将FDB放入培养基培养，第0、1、2、3d检测培养基的PH值。实验分组为：(1)细胞与骨（CB组）；(2)细胞组；(3)冻干骨组。采用两种不同的方法共培养AD-MSCs和FDB：静态共培养方法(二维-2D)和动态培养法(三维-3D)。AD-MSCs和FDB动态和静态共培养24h后，甲醛固定， HNO3中脱钙，，石蜡包埋。4μm切片，HE染色。图像分析软件对于粘附在FDB的细胞进行半定量分析。随机选取9个视野，200倍显微镜下对于细胞进行计数。动态共培养24h后， FDB转至12孔板中并在CO2孵箱中孵育6d。CB组在动态共培养24h，12孔板内培养3d，6d分别用0.05%胰酶消化分离FDB和AD-MSCs，台盼蓝染色，对活细胞进行计数，静态培养0d，3d和6d后的细胞活性同样操作。 结果 原代细胞为长梭形，贴壁生长，流式细胞仪检测结果显示， CD44高表达，CD49d低表达，CD31、CD106阴性。MTT法结果表明AD-MSCs经多次传代培养后，其增殖能力没有明显降低。与单纯培养基相比，含FDB的培养基pH值随着时间的推移没有明显变化（P0.05），AD-MSCs和FDB动态或静态共培养24h后，200倍显微镜下计数，静态态培养为3.01±0.16，动态培养为4.15±0.11，二者比较有显著差异（P 0.05），而且动态共培养在FDB表面形成多细胞层，在静态共培养中没有此现象。台盼蓝染色在动态培养转为静态培养后3和6d， FDB表面的活细胞数量减少，静态培养后第3、6d比也出现出现减少，二者比较有显著差异。 结论 与静态培养法相比，动态培养法能促进脂肪间充质干细胞在冻干骨表面的粘附数量并且活力增加。
【关键词】：动态培养法 脂肪间充质干细胞 冻干骨 粘附
【学位授予单位】：辽宁医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 中文论著摘要4-6
• 英文论著摘要6-8
• 英文缩略语表8-9
• 前言9-10
• 实验材料与方法10-14
• 一、实验材料与仪器10-11
• 二、实验方法11-14
• 三、统计分析14
• 实验结果及分析14-18
• 一、AD-MSCs形态14-15
• 二、细胞表面抗原的表达15
• 三、大鼠AD-MSCs的增殖活性15-16
• 四、培养基pH值的检测结果16
• 五、组织学观察16-17
• 六、细胞生存率的评价——台盼蓝染色17-18
• 讨论18-20
• 结论20-21
• 本实验的创新性自我评价21-22
• 参考文献22-25
• 文献综述25-34
• 参考文献30-34
• 在学期间科研成绩34-35
• 致谢35-36
• 个人简介36-37

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 李德强;刘培来;汤亭亭;卢建熙;张元凯;李明;李振中;戴\戎;;动态培养对骨髓间充质干细胞在三维多孔支架中成骨分化的影响[J];山东大学学报(医学版);2010年04期

本文编号：849642