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骨膜去细胞生物支架的制备和鉴定

发布时间:2017-09-24 15:22

  本文关键词:骨膜去细胞生物支架的制备和鉴定


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【摘要】:目的制备兔骨膜去细胞生物支架,为骨缺损、骨不愈的组织工程研究提供天然的生物支架材料。方法取健康新西兰大白兔,游离双侧胫骨近端内侧骨膜,通过物理冻融(-80℃,24h)、去污剂洗脱(triton-X 100、SDS)和酶消化(DNA酶、RNA酶)获取骨膜去细胞生物支架。通过HE染色、DAPI染色、琼脂糖电泳和基因组DNA定量分析(n=5)测定细胞结构及DNA成分残留;Masson染色和羟脯氨酸测定法(n=6)定性定量检测骨膜细胞外基质的主要成分(胶原)的保留情况;扫描电子显微镜下观察骨膜去细胞生物支架的表面微结构;CCK8法检测支架浸提液毒性;皮下包埋实验(n=4)观察该支架的免疫排斥反应。结果 HE染色和4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色表明去细胞支架无残留细胞;琼脂糖电泳未见明显DNA条带;DNA定量检测显示组织去细胞率达95%以上;Masson染色及羟脯氨酸测定表明去细胞支架胶原成分被保留;扫描电子显微镜下细胞外基质呈现三维网状疏松结构;不同体积分数的浸提液对骨膜细胞的增殖与对照组(普通培养基)比较无明显抑制作用(P0.05);异体皮下包埋实验显示,该去细胞支架免疫排斥反应不明显。结论运用物理冻融、去污剂洗脱和酶消化等方法所获取的骨膜去细胞生物支架细胞去除彻底,细胞外基质的结构及主要成分保留完好,生物相容性良好。
【作者单位】: 温州医科大学附属第一医院骨科;
【关键词】去细胞 骨膜 胶原 生物相容性 皮下包埋 Masson染色 扫描电子显微术
【分类号】:R687;R318.08
【正文快照】: 骨缺损、骨不愈是临床上常见的骨科难治性疾病,其治疗棘手、预后不肯定,给患者带来极大的经济和心理负担。骨膜具有较强的成骨能力,在骨折愈合修复方面扮演着重要角色,骨膜也被认为是促进骨移植材料在移植区域发挥修复作用的始动因素[1]。国内外也有较多关于骨膜移植临床上治

【参考文献】

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【共引文献】

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6 张承e,

本文编号:912149


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