食道平滑肌的体外构建及其体内生物相容性研究

发布时间：2017-09-28 00:18

  本文关键词：食道平滑肌的体外构建及其体内生物相容性研究

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【摘要】：平滑肌，一种具有自律性的无横纹肌肉组织，在人和动物体内分布广泛，普遍存在于消化道、呼吸道、血管、泌尿、生殖等诸多内脏器官中，它通过收缩蠕动来协助器官的功能发挥，是重要的功能组织。食道平滑肌具有内环外纵的结构，是食道中重要的功能部分。食道平滑肌的构建和工程化再生对于食道组织工程的研究具有重要的科学意义和应用价值。同时，也为其它器官中的平滑肌组织的重构和再生提供技术参考和实验依据。 本研究旨在制备良好生物相容性和生物降解性的支架，以引导内环外纵结构的食道肌层组织的再生。首先验证了带有微槽图案的支架具有体外诱导细胞趋向生长的作用。利用自制的硅片模具和医用聚氨酯材料制备了模拟平滑肌纹路的支架P1和P2，该结构经扫描电镜（SEM）检测得到证实。从健康成年兔子的食道中提取原代的食道平滑肌细胞，体外扩增后，种植在以丝素蛋白接枝改性后的支架上，采用HE染色、免疫组化分析和免疫荧光染色的方法证实了原代平滑肌细胞，同时也证实了两种支架对细胞生长的引导作用。通过细胞活力测试，确立了最佳的支架改性方法（即最佳的接枝反应条件），且发现连续微槽的P1较间断微槽的P2更能满足细胞的生长空间，更易促进细胞的方向性生长 据文献报道，凹槽支架相对于凸槽支架在诱导细胞组织方向性生长上更为显著。因此，我们在实验中也设计了凹型微槽结构的支架。我们用道康宁硅橡胶刻印出与之前模具纹路吻合的聚二甲基硅氧烷（PDMS,Polydimethylsiloxane）模具，从而制备了带有凹槽的支架P3，通过光镜图可以看出这种凹槽支架也具有对细胞生长的趋向诱导作用，进一步免疫荧光检测，发现这种支架对细胞类型的转换也起到了引导作用。并进行了动物体内实验。将丝素蛋白接枝后的凹槽支架，植入成年健康兔的皮下，并与不同表面改性或未改性的支架周围组织再生情况进行比较，通过冷冻切片以及HE染色等方法，确定了凹槽支架的体内生物相容性及其引导食道原位平滑肌组织再生的作用更为显著。在这基础上，对这些图案化的、经表面改性的支架进行了食道平滑肌原位修复和再生实验。术后试验兔能够存活和进食。冷冻切片后HE染色、免疫荧光观察，，明确了这种支架结构对内环外纵结构的食道肌层组织再生的引导作用。
【关键词】：平滑肌细胞 支架构建 生物相容性 原位修复 食道组织工程
【学位授予单位】：宁波大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-17
• 1 材料与仪器设备17-19
• 1.1 实验材料17-18
• 1.2 实验仪器18-19
• 2 实验方法19-26
• 2.1 支架的制备19-21
• 2.1.1 丝素蛋白的提取和纯化19
• 2.1.2 支架的制备19-20
• 2.1.3 支架的改性20-21
• 2.2 原代细胞的提取和培养21-23
• 2.2.1 食道平滑肌细胞提取及其在支架上的培养21
• 2.2.2 检测和表征21-23
• 2.3 动物体内实验23-26
• 2.3.1 支架的兔皮下试验探究23-24
• 2.3.2 平滑肌原位修复24-26
• 3 结果26-44
• 3.1 支架的构建及其细胞相容性26-34
• 3.1.1 支架的结构26-29
• 3.1.2 SMC 在支架上的生长29-34
• 3.2 支架的细胞和组织相容性34-37
• 3.3 原位修复37-44
• 3.3.1 肌层的片状支架替代37-41
• 3.3.2 肌层的环形支架替代41-44
• 4 讨论44-47
• 5 结论47-48
• 参考文献48-53
• 附录A 主要试剂配制53-54
• 附录B 中英文词对照54-55
• 在学研究成果55-56
• 致谢56-57
• 综述57-73
• 参考文献69-73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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本文编号：932738