软骨前体细胞的分离鉴定及IL-1β对其成软骨分化的影响

发布时间：2017-10-04 19:13

  本文关键词：软骨前体细胞的分离鉴定及IL-1β对其成软骨分化的影响

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【摘要】：目的对正常软骨中的软骨前体细胞进行分离、鉴定,并对不同浓度IL-1β对软骨前体细胞的成软骨分化影响进行研究。方法取正常成年新西兰大白兔的软骨细胞,通过纤连蛋白粘连分离出软骨前体细胞,采用流式细胞仪对其细胞表型进行鉴定,倒置相差显微镜观察其克隆增殖,并行成骨、成脂、成软骨三系分化观察。培养软骨前体细胞团并分为4组,分别加入普通H-DMEM培养基(A组)、成软骨诱导分化培养基(B组)、成软骨诱导分化培养基+0.1 ng/mL IL-1β(C组)、成软骨诱导分化培养基+1.0 ng/mL IL-1β(D组),培养3周行组织学、生物化学、实时荧光定量PCR等检测,观察IL-1β的影响。结果在正常软骨细胞中存在软骨前体细胞,经鉴定有干细胞表型阳性表达,有与干细胞相似的克隆增殖能力及分化能力。HE染色示,C、D组中细胞团块较B组明显减小,细胞呈肥大样改变。番红O、Ⅱ型胶原及Ⅹ型胶原染色示,B组较A组染色深,C、D组均浅于B组,D组浅于C组。生物化学成分测定示,C、D组的总胶原、糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)相对含量及GAG/DNA比值均显著低于B组,D组显著低于C组,差异均有统计学意义(P0.05);C、D组DNA相对含量均显著高于B组(P0.05),但C、D组间差异无统计学意义(P0.05)。实时荧光定量PCR检测示,C、D组Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、Sox-9 mRNA相对表达量均显著低于B组,D组显著低于C组,差异均有统计学意义(P0.05);而C、D组Runx-2和MMP-13mRNA相对表达量均显著高于B组,D组显著高于C组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论在正常软骨组织中存在一种有干细胞特性的软骨前体细胞,其有克隆和潜在分化的能力。IL-1β对软骨前体细胞成软骨分化有抑制作用,并有促进成骨分化的可能。
【作者单位】： 苏州市吴江区第一人民医院骨科;南京医科大学附属南京医院骨科;
【关键词】： 软骨前体细胞 炎性因子 IL-β 诱导分化 软骨修复
【分类号】：R687;R318.08
【正文快照】： 关节软骨由于自身组织无血管,其自身修复能力极为有限[1-2],一旦损伤往往会遗留疼痛或功能障碍,最后易致关节退变及骨性关节炎[3]。目前,临床上对关节软骨损伤的主要治疗方法有骨髓刺激技术(以微骨折术为代表[4-5])、骨软骨移植技术(以马赛克技术为代表[6])等,但结果均不令人

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本文编号：972354