纳米材料的制备及其在蛋白激酶活性检测中的应用

发布时间：2017-10-06 18:34

  本文关键词：纳米材料的制备及其在蛋白激酶活性检测中的应用

  更多相关文章： 石墨烯量子点 多肽 蛋白质激酶 抑制剂 金纳米粒子 鞣花酸 光致发光

【摘要】：本论文由综述和研究工作两部分组成。综述部分，首先综述了纳米材料的相关概念，纳米材料的各种特性及其应用；其次，介绍了蛋白质激酶的实际意义以及各种分析方法；最后，简单概括了各种纳米材料在蛋白质激酶检测中的应用。其中，研究工作由两个实验体系组成。 本论文的实验研究内容具体如下几点： 1.构建了一种基于Zr4+离子与磷酸化的石墨烯量子点-多肽（GQDs-Peptide）复合物之间的多重螯合作用高灵敏检测蛋白质激酶CK2活性的光化学分析方法。在优化的条件下，随着蛋白质激酶CK2浓度的增加，GQDs-Peptide复合物的荧光强度逐渐下降。另外，，这种方法在蛋白质激酶抑制剂筛选方面有很大的应用潜能。通过在人体血清中检测存在能够抑制激酶CK2磷酸化的四种抑制剂（鞣花酸，DRB，大黄素，槲皮素）以及不加四种抑制剂系统的信号变化，证明了这种基于石墨烯量子点的检测方法能够用于实际生物样品中蛋白激酶抑制剂的筛选。 2.通过Zr4+离子与磷酸化的金纳米粒子-多肽复合物之间的多重螯合作用，诱导金纳米粒子发生团聚，从而定量检测蛋白激酶PKA的活性。该法不仅可以检测PKA，通过改变多肽的序列，可以检测不同多肽对应的蛋白质激酶。在优化的条件下，随着蛋白激酶PKA的浓度的增加，金纳米粒子-多肽复合物对应的紫外吸收峰逐渐减小，表明其发生了团聚反应。另外，这种方法能够用于蛋白激酶PKA抑制剂的筛选。本文以PKA典型的抑制剂鞣花酸为例，由于磷酸化的金纳米粒子-多肽复合物在Zr4+离子存在下，发生团聚，引发金纳米粒子的共振光散射峰增强，利用共振光散射峰的增强，分析抑制剂鞣花酸的半抑制浓度。
【关键词】：石墨烯量子点 多肽 蛋白质激酶 抑制剂 金纳米粒子 鞣花酸 光致发光
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R318.08;TB383.1
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 第1章 绪论7-16
• 1.1 纳米材料概述7-8
• 1.1.1 纳米材料的概念7
• 1.1.2 纳米材料的分类7-8
• 1.1.3 纳米材料的特征8
• 1.2 蛋白质激酶8-12
• 1.2.1 蛋白质激酶简介8-9
• 1.2.2 蛋白质激酶的分类9
• 1.2.3 蛋白质激酶活性分析方法9-12
• 1.3 纳米材料在蛋白激酶活性检测中的应用12-14
• 1.3.1 金属纳米材料在蛋白激酶检测中的应用12-13
• 1.3.2 量子点在蛋白激酶检测中的应用13-14
• 参考文献14-16
• 第2章 以石墨烯量子点为发光探针检测蛋白激酶 CK2 的活性16-30
• 2.1 前言16-17
• 2.2 实验部分17-19
• 2.2.1 化学试剂与材料17
• 2.2.2 仪器设备17-18
• 2.2.3 氧化石墨烯的制备18
• 2.2.4 石墨烯量子点的制备18
• 2.2.5 多肽-石墨烯量子点复合物的制备18
• 2.2.6 蛋白激酶 CK2 活性检测18-19
• 2.2.7 CK2 抑制剂和 IC_(50)的分析19
• 2.3 结果与讨论19-27
• 2.3.1 GQDs 的表征19-20
• 2.3.2 实验条件优化20-21
• 2.3.3 荧光检测蛋白激酶 CK2 的活性21-24
• 2.3.4 共振光散射检测蛋白激酶 CK2 的活性24-25
• 2.3.5 对 GQDs 反应结果的表征25
• 2.3.6 人体血清中 CK2 抑制剂检测和 IC_(50)分析25-27
• 2.4 结论27
• 参考文献27-30
• 第3章 基于金-多肽复合物的团聚效应检测蛋白激酶 PKA 的活性30-39
• 3.1 前言30-31
• 3.2 实验部分31-32
• 3.2.1 化学试剂与材料31
• 3.2.2 仪器设备31
• 3.2.3 金纳米粒子的合成31
• 3.2.4 金纳米粒子-多肽复合物的制备31-32
• 3.2.5 蛋白激酶 PKA 活性检测32
• 3.2.6 PKA 抑制剂检测和 IC_(50)的分析32
• 3.3 结果与讨论32-36
• 3.3.1 对金纳米粒子的表征32-33
• 3.3.2 紫外检测蛋白激酶 PKA 活性33-34
• 3.3.3 共振光散射检测蛋白激酶 PKA 的活性34-35
• 3.3.4 对金纳米粒子反应结果的表征35-36
• 3.3.5 蛋白质激酶 PKA 抑制剂检测和 IC_(50)分析36
• 3.4 结论36-37
• 参考文献37-39
• 致谢39-40
• 攻读硕士期间的研究成果40

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