人老化椎间盘髓核细胞体外老化模型的建立与细胞老化表型的初探

发布时间：2017-03-30 19:23

  本文关键词：人老化椎间盘髓核细胞体外老化模型的建立与细胞老化表型的初探，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：构建人椎间盘髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)老化模型,探讨老化NPCs中生长因子的表达差异及其与椎间盘退变(intervertebral disc degeneretion,IDD)的关系。方法：1、体外单层培养人正常NPCs系(Scien Cell4800),连续1：2传代培养,诱导建立NPCs复制性老化(replication senescence cells,RS)模型；2、不同浓度双氧水作用于未老化NPCs,模拟椎间盘氧化应激微环境,诱导建立应激诱导过早老化(stress induced premature senescence cells,SIPS)模型；3、细胞衰老β-半乳糖苷酶(Senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal)染色检测NPCs阳性表达率；4、流式细胞仪检测G1期细胞比例及细胞凋亡率。CCK-8检测不同代次细胞增殖活性；5、应用Agilent表达谱芯片初步筛选出正常与老化NPCs中差异性表达的生长因子;6、实时荧光定量PCR进一步验证所筛选生长因子的表达差异。结果：1、NPCs经连续传代、双氧水诱导可分别构建RS模型及SIPS模型；2、两种老化模型的SA-β-Gal阳性表达的细胞比例均高于70%,G1期细胞比例均高于80%,凋亡率均低于10%;3、Agilent表达谱芯片筛选出的碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)与血管内皮生长因子a(Vascular endothelial growth factor a, VEGF-a)在不同老化模型中,表达有显著性差异(p0.05),特别是bFGF在SIPS模型中的表达显著高于RS模型(p0.05)。两种老化模型中的bFGF表达量显著高于正常组(p0.05)。结论：1、双氧水诱导所引起的氧化应激可促进细胞过早老化;2、老化NPCs上调bFGF,且SIPS模型中的上调幅度显著高于RS,SIPS可能比RS更加上调bFGF;3、不同老化诱导条件下,生长因子的表达可能存在差异,bFGF可能参与椎间盘再血管化及自我修复。
【关键词】：细胞老化 生长因子 椎间盘退变 髓核细胞 氧化应激 双氧水
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R681.5
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-11
• 缩略词表11-13
• 前言13-14
• 文献综述14-26
• 第一章：材料及方法26-33
• 1.1 主要器材、试剂、实验对象、时间及地点26-27
• 1.2 实验方法27-31
• 1.3 统计学分析31
• 1.4 实验技术路线31-33
• 第二章：实验结果33-38
• 2.1 人正常与老化髓核细胞形态学观察33
• 2.2 SA-β-Gal染色33-34
• 2.3 细胞周期34-35
• 2.4 细胞凋亡35
• 2.5 CCK-8检测不同代次细胞增殖活性35-36
• 2.6 生长因子筛选36-37
• 2.7 Real-time PCR检测37-38
• 第三章：讨论38-41
• 3.1 细胞老化的两条信号通路38
• 3.2 老化的造模标准38
• 3.3 细胞老化在椎间盘中的作用38-39
• 3.4 生长因子在椎间盘中的作用39-40
• 3.5 本研究的意义40-41
• 第四章：结论41-42
• 参考文献42-50
• 致谢50-51
• 作者简介51

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