MicroRNA-223-5p调控MC3T3-E1细胞成骨分化的作用机制研究
发布时间：2021-01-10 06:06
研究背景我国老龄化已日益严重,骨类疾病作为老年人群高发的疾病已引起了医学界的重视。许多研究表明miRNAs调控骨代谢平衡,参与骨类疾病发生过程,但miR-223-5p对成骨分化的调控作用至今未见报道。研究目的本研究通过探究miR-223-5p对MC3T3-E1细胞成骨分化的调控作用和机制,为治疗骨类疾病提供理论依据。研究方法1、miR-223-5p对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响（1）MC3T3-E1细胞分别在完全培养基和成骨分化诱导培养基培养,RT-qPCR检测诱导前后miR-223-5p、ALP、OCN和Runx2表达,Western Blot检测ALP、OCN和Runx2表达和采用ALP活性检测。（2）MC3T3-E1 细胞转染 miR-223-5p mimics 或 inhibitor,RT-qPCR检测过表达、干扰效率和测定ALP、OCN和Runx2表达,ALP活性检测和茜素红染色。2、miR-223-5p调控HDAC2促进MC3T3-E1细胞成骨分化的作用机制研究（1）生物信息学及数据库分析预测miR-223-5p的下游靶基因。（2）MC3T3-E1细胞转染 miR-2...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：121 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图４ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞诱导成骨分化０、７、１４ｄ的ＡＬＰ活性??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｏｆ?ＡＬＰ?ｉｎ?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?０＞?７＞?１４?ｄａｙｓ??
的抑制作用增大，ＯＣＮ的表达水平逐渐升高。??不同浓度的ＣＡＹ１０６８３干扰ＨＤＡＣ２表达后，ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞Ｒｕｎｘ２基因表??达水平见图１７。结果显示随着ＣＡＹ１０６８３药物浓度的升高，ＨＤＡＣ２的表达逐步??降低，而Ｒｕｎｘ２的表达逐步升高。０．０１?ｐＭ／Ｌ?ＣＡＹ１０６８３作用的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞??中Ｒｕｎｘ２表达量是未被ＣＡＹ１０６８３作用的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞的１．２１倍；??ＣＡＹ１０６８３作用的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞中Ｒｕｎｘ２表达量是未被ＣＡＹ１０６８３作用的??ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞的２．２３倍，组间比较两者有显著性差异（Ｐ＜０．０５）；?１．０｜ｉＭ／Ｌ??ＣＡＹ１０６８３作用的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞中Ｒｕｎｘ２表达量是未被ＣＡＹ１０６８３作用的??ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞的２．９５倍，组间比较两者有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。ＣＡＹ１０６８３??作用后，ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞中Ｒｕｎｘ２的表达明显升高，且随着ＣＡＹ１０６８３药物浓??度的增大，Ｒｕｎｘ２的表达逐渐升高，当ＣＡＹ１０６８３的浓度为１．０ｐＭ／Ｌ时，Ｒｕｎｘ２??的表达水平最高，表明随着ＣＡＹ１０６８３对ＨＤＡＣ２的抑制作用増大，Ｒｕｎｘ２的表??达水平逐渐升高。??图１８是采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分别检测不同浓度的ＣＡＹ１０６８３作用下，ＭＣ３Ｔ３－??Ｅ１细胞中ＨＤＡＣ２蛋白水平表达变化
的表达水平最高，表明随着ＣＡＹ１０６８３对ＨＤＡＣ２的抑制作用増大，Ｒｕｎｘ２的表??达水平逐渐升高。??图１８是采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分别检测不同浓度的ＣＡＹ１０６８３作用下，ＭＣ３Ｔ３－??Ｅ１细胞中ＨＤＡＣ２蛋白水平表达变化，以及干扰ＨＤＡＣ２表达后ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细??胞ＡＬＰ、ＯＣＮ和Ｒｕｎｘ２蛋白表达情况。结果显示随着ＣＡＹ１０６８３药物浓度的升??高，ＨＤＡＣ２的蛋白表达量逐步降低，而成骨分化标志物ＡＬＰ、ＯＣＮ和Ｒｕｎｘ２??蛋白表达量逐步升高。??为多方面探宄ＨＤＡＣ２对ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞成骨分化的调控作用，我们选用??ＨＤＡＣ２白勺特异性抑制齐！Ｊ?ＣＡＹ１０６８３下调ＨＤＡＣ２的基因和蛋白表达水平。??ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞不同浓度的ＣＡＹ１０６８３作用下，ＨＤＡＣ２基因和蛋白表达水平整??体降低，随着ＣＡＹ１０６８３药物浓度的增大，ＨＤＡＣ２基因和蛋白表达水平逐渐降??低，即ＨＤＡＣ２与ＣＡＹ１０６８３呈剂量依赖关系。随着ＨＤＡＣ２表达水平降低，成??骨分化标志物ＡＬＰ、ＯＣＮ和Ｒｕｎｘ２基因和蛋白表达水平逐步升高，与质粒转染??７０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]MiRNA对成骨分化调控及骨质疏松发生的研究进展[J]. 潘虹旭. 中国骨质疏松杂志. 2018(01)
[2]miR-34b对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及相关机制[J]. 齐磊. 临床与病理杂志. 2016(07)
[3]巴戟天水提取物对间充质干细胞成骨分化中OPG/RANKL表达的影响[J]. 吴国志,欧积壮,吴昌新. 海南医学. 2016(03)
[4]860例女性PTH、25（OH）D3、CT、骨代谢标志物与BMD相关性[J]. 张萌萌,李亚刚,马倩倩,高远,毛未贤,梁斌斌,刘颖. 中国妇幼保健. 2012(32)
[5]骨代谢标志物在多发性骨髓瘤诊治中的应用现状[J]. 王琳,牛爱军. 实用医药杂志. 2011(09)
[6]叠加造模后膝关节骨密度改变及软骨基质金属蛋白酶-13的表达[J]. 贺文楠,蒋振刚,左新成. 医学研究生学报. 2010(06)
[7]骨质疏松骨代谢生化指标的研究进展[J]. 肖恩,孟萍. 中国骨质疏松杂志. 2008(03)
[8]基质金属蛋白酶-1、-2与女性年龄、骨转换生化指标及骨密度的关系[J]. 张红,罗湘杭,谢辉,伍贤平,单鹏飞,曹行之,廖二元. 中华内科杂志. 2006(04)
[9]骨骼发育中的转录因子Cbfa1[J]. 刘文广,王洪振,曾宪录. 生物化学与生物物理进展. 2003(01)
[10]尿吡啶啉和脱氧吡啶啉是骨吸收特异性生化标志物[J]. 贾成瑶,李萍. 中国临床康复. 2002(15)
本文编号：2968203
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：121 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图４ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞诱导成骨分化０、７、１４ｄ的ＡＬＰ活性??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｏｆ?ＡＬＰ?ｉｎ?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?０＞?７＞?１４?ｄａｙｓ??
的抑制作用增大，ＯＣＮ的表达水平逐渐升高。??不同浓度的ＣＡＹ１０６８３干扰ＨＤＡＣ２表达后，ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞Ｒｕｎｘ２基因表??达水平见图１７。结果显示随着ＣＡＹ１０６８３药物浓度的升高，ＨＤＡＣ２的表达逐步??降低，而Ｒｕｎｘ２的表达逐步升高。０．０１?ｐＭ／Ｌ?ＣＡＹ１０６８３作用的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞??中Ｒｕｎｘ２表达量是未被ＣＡＹ１０６８３作用的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞的１．２１倍；??ＣＡＹ１０６８３作用的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞中Ｒｕｎｘ２表达量是未被ＣＡＹ１０６８３作用的??ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞的２．２３倍，组间比较两者有显著性差异（Ｐ＜０．０５）；?１．０｜ｉＭ／Ｌ??ＣＡＹ１０６８３作用的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞中Ｒｕｎｘ２表达量是未被ＣＡＹ１０６８３作用的??ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞的２．９５倍，组间比较两者有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。ＣＡＹ１０６８３??作用后，ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞中Ｒｕｎｘ２的表达明显升高，且随着ＣＡＹ１０６８３药物浓??度的增大，Ｒｕｎｘ２的表达逐渐升高，当ＣＡＹ１０６８３的浓度为１．０ｐＭ／Ｌ时，Ｒｕｎｘ２??的表达水平最高，表明随着ＣＡＹ１０６８３对ＨＤＡＣ２的抑制作用増大，Ｒｕｎｘ２的表??达水平逐渐升高。??图１８是采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分别检测不同浓度的ＣＡＹ１０６８３作用下，ＭＣ３Ｔ３－??Ｅ１细胞中ＨＤＡＣ２蛋白水平表达变化
的表达水平最高，表明随着ＣＡＹ１０６８３对ＨＤＡＣ２的抑制作用増大，Ｒｕｎｘ２的表??达水平逐渐升高。??图１８是采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分别检测不同浓度的ＣＡＹ１０６８３作用下，ＭＣ３Ｔ３－??Ｅ１细胞中ＨＤＡＣ２蛋白水平表达变化，以及干扰ＨＤＡＣ２表达后ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细??胞ＡＬＰ、ＯＣＮ和Ｒｕｎｘ２蛋白表达情况。结果显示随着ＣＡＹ１０６８３药物浓度的升??高，ＨＤＡＣ２的蛋白表达量逐步降低，而成骨分化标志物ＡＬＰ、ＯＣＮ和Ｒｕｎｘ２??蛋白表达量逐步升高。??为多方面探宄ＨＤＡＣ２对ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞成骨分化的调控作用，我们选用??ＨＤＡＣ２白勺特异性抑制齐！Ｊ?ＣＡＹ１０６８３下调ＨＤＡＣ２的基因和蛋白表达水平。??ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞不同浓度的ＣＡＹ１０６８３作用下，ＨＤＡＣ２基因和蛋白表达水平整??体降低，随着ＣＡＹ１０６８３药物浓度的增大，ＨＤＡＣ２基因和蛋白表达水平逐渐降??低，即ＨＤＡＣ２与ＣＡＹ１０６８３呈剂量依赖关系。随着ＨＤＡＣ２表达水平降低，成??骨分化标志物ＡＬＰ、ＯＣＮ和Ｒｕｎｘ２基因和蛋白表达水平逐步升高，与质粒转染??７０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]MiRNA对成骨分化调控及骨质疏松发生的研究进展[J]. 潘虹旭. 中国骨质疏松杂志. 2018(01)
[2]miR-34b对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及相关机制[J]. 齐磊. 临床与病理杂志. 2016(07)
[3]巴戟天水提取物对间充质干细胞成骨分化中OPG/RANKL表达的影响[J]. 吴国志,欧积壮,吴昌新. 海南医学. 2016(03)
[4]860例女性PTH、25（OH）D3、CT、骨代谢标志物与BMD相关性[J]. 张萌萌,李亚刚,马倩倩,高远,毛未贤,梁斌斌,刘颖. 中国妇幼保健. 2012(32)
[5]骨代谢标志物在多发性骨髓瘤诊治中的应用现状[J]. 王琳,牛爱军. 实用医药杂志. 2011(09)
[6]叠加造模后膝关节骨密度改变及软骨基质金属蛋白酶-13的表达[J]. 贺文楠,蒋振刚,左新成. 医学研究生学报. 2010(06)
[7]骨质疏松骨代谢生化指标的研究进展[J]. 肖恩,孟萍. 中国骨质疏松杂志. 2008(03)
[8]基质金属蛋白酶-1、-2与女性年龄、骨转换生化指标及骨密度的关系[J]. 张红,罗湘杭,谢辉,伍贤平,单鹏飞,曹行之,廖二元. 中华内科杂志. 2006(04)
[9]骨骼发育中的转录因子Cbfa1[J]. 刘文广,王洪振,曾宪录. 生物化学与生物物理进展. 2003(01)
[10]尿吡啶啉和脱氧吡啶啉是骨吸收特异性生化标志物[J]. 贾成瑶,李萍. 中国临床康复. 2002(15)
本文编号：2968203
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