探讨丙泊酚作用下组织蛋白酶K介导的血管新生机制

发布时间：2024-05-23 02:30

　　目的:观察丙泊酚对人脐静脉内皮细胞的组织蛋白酶K(CathepsinK,CatK)和Notch1蛋白表达的影响,探讨丙泊酚对CatK和Notch1蛋白表达的意义。方法:选用人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为正常组(CON)和丙泊酚组(PF),当细胞长满80%左右时进行给药,以20μM丙泊酚浓度处理24h。收集上清采用ELISA法检测VEGF含量、收集部分细胞用Western Blot检测Cat K、c-Notch1和t-Notch1表达,若观察到CatK表达具有显著性变化,则进一步进行蛋白组学实验。采用TMT定量蛋白组学方法鉴定差异表达蛋白。应用Mascot软件对二级质谱图信息进行定性定量计算。对差异蛋白进行GO注释、亚基分类、GO富集分析、KEGG富集分析和结构域富集分析。结果:(1)丙泊酚介导人脐静脉内皮细胞中CatK表达增强和Notch1活化。(2)丙泊酚对人脐静脉内皮细胞的VEGF分泌无明显变化。(3)经过TmT定量蛋白组学实验,共筛选出115个差异表达蛋白,其中上调蛋白71个,下调蛋白44个。(4)差异表达蛋白GO分析结果,上调蛋白主要参与的生物过程,包括细胞、单生物及代...

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１？丙泊酌对ＣａｔＫ、ｃ－Ｎｏｔｃｈｌ和ｔ－Ｎｏｔｃｈｌ的表达??注．？与对照组相比，＊＊表示Ｐ＜０．０１??

３．?１两泊齡对Ｃａｔ?Ｋ和Ｎｏｔｃｈｌ表达的影响??丙泊酌促进人脐静脉细胞中ＣａｔＫ、ｃ－Ｎｏｔｃｈｌ的表达，对ｔ－Ｎｏｔｃｈｌ表达无明??显变化，见图１。??ＣＯＮ?ＰＦ?ＣＯＮ?ＰＦ??ＣａｔＫ?ｃ－Ｎｏｔｄｉｌ?祀?＿??＼?＊??ｌ－Ｎ—ｌ?一一??ｌｅｃｔｉｎ?ｍｍ?....

图３．差异表达蛋白数目??

本研宄中鉴定到的蛋白质一共为６０９４个，其中含有定量信息的蛋白质为??５３４３个。按照１．３倍差异倍数，ｐ＜０．０５为标准，共筛选出１１５个差异表达蛋白，??其中上调蛋白７１个，下调蛋白４４个，见图３。??？（）??■■■■??６０??＾?１?，??Ｉ?－??■，．．：?：■■Ｉ....

图２．丙泊酚对ＶＥＧＦ分泌的影响??

３．?２丙泊酚对ＶＥＧＦ分泌的影响??丙泊酚组ＶＥＧＦ分泌量为１１２９±１０７ｐｇ／ｍｌ，对照组ＶＥＧＦ分泌量为??１１８１±９６ｐｇ／ｍｌ，丙泊酚组与对照组相比，Ｐ＞０．０５，没有显著性差异，见图２。??１１??

图４．上调蛋白ＧＯ分析结果??

能为结合（ＨＥＣＴＤ１等４２个）、催化活性（ＡＢＣＦ２等２９个）、核酸结合转录??因子活性（ＵＨＲＦ１）、转录因子活性、蛋白结合（ＮＡＣＡ）、转运（ＡＢＣＦ２），??图４和图５。??１３??

本文编号：3980872