硫酸软骨素合成酶3敲除小鼠的高效构建及其在椎间盘退变中的研究

发布时间：2024-06-07 04:15

　　研究背景与目的下腰痛(Low back pain,LBP)极其常见,致残率高,严重影响患者的生活质量。每年因LBP产生的经济花费巨大,给家庭和社会带来沉重负担。目前认为,LBP的首要病因是椎间盘退变(Intervertebral disc degeneration,IDD)。IDD主要表现为椎间盘含水量的降低及椎间隙狭窄。椎间盘的含水量主要由聚蛋白多糖决定,而聚蛋白多糖分子的保水能力则主要依赖于其侧链上的硫酸软骨素(Chondroitin sulfate,CS)。CS主要由硫酸软骨素合成酶(Chondroitin synthase,CHSY)催化合成,然而CHSY在IDD中的作用还未阐明。我们的前期结果显示,人发生退变的椎间盘内Chsy3的表达量显著下降,并随着Pfirrmann退变分级的递增其表达量递减。由于IDD的发病机制复杂,目前缺乏能有效缓解或逆转IDD的治疗方法。因此,动物模型对深入研究IDD的机制及探索新的治疗方法极其重要。然而,国际上缺乏公认有效,且能够可控,并模拟正常退变进程的IDD动物模型。随着CRISPR-Cas9技术和半克隆技术的出现及优化,基因敲除小鼠的构建变得...

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1人椎间盘退变时，CHSY3的表达降低（A）椎间盘退变的Pfirrmann分级。（B）椎间盘退变时硫酸软骨素相关酶的表达变化。（C）CHSY3的表达量随Pfirrmann分级的递增而递减。（t检验，P值＜0.05，*；P值＜0.01，**）。Figure....

图1-2Chsy3基因sgRNA的设计的3个碱基代表PAM序列（5'-AGG-3'），而蓝色的20个碱基则代表ChsyRNA序列。Figure1-2DesignofChsy3sgRNAeredbasesrepresentPAMsequ....

图1-1Chsy3基因结构示意图Figure1-1SchematicdiagramofgeneticstructureofChsy3hsy3基因的CRISPR-Cas9敲除质粒的构建为了达到最佳的基因敲除效果，我们选择小鼠Chsy3基因的1号外....

图1-3pX330-mCherry-Chsy3-sgRNA质粒示意图Figure1-3SchematicdiagramofpX330-mCherry-Chsy3-sgRNAplasmid

本文编号：3990765