BMP-2、TGF-β3协同调控滇南小耳猪PBMSCs成软骨分化研究

发布时间：2024-12-22 07:58

　　第一部分 滇南小耳猪PBMSCs的动员、体外培养与鉴定[目的]探讨滇南小耳猪外周血源性间充质干细胞(PBMSCs)的最佳动员方法,并对其生物学特性、多向分化能力进行鉴定,为后续用于种子细胞实验奠定基础。[方法](1)使用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)与AMD3100双因子动员滇南小耳猪外周血源性间充质干细胞(PBMSCs),并分为4组:A组(G-CSF组)、B 组(AMD3100 组)、C 组(G-CSF+AMD3100 组)、D 组(空白对照组);(2)采用密度梯度离心及贴壁法培养PBMSCs,观察细胞形态,通过成纤维细胞集落形成培养法(CFU-F)检测集落形成及流式细胞仪检测CD45-CD90+细胞群比例,探讨最佳动员方法;(3)流式细胞仪检测最佳动员后获得的P2 PBMSCs CD44、CD90、CD34、CD45的表达;并取P2 PBMSCs行成骨、成软骨、成脂诱导分化,分别用茜素红、阿利新蓝、油红O染色检测PBMSCs多向分化能力。[结果](1)G-CSF+AMD3100动员组获取的外周血标本培养7d后见较多短梭形及多角形细胞贴壁生长,培养10d后见贴壁细胞明显呈集落样生长;...

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【部分图文】：

图１－１：?ＰＢＭＳＣｓ原代培养ａ：Ｇ－ＣＳＦ＋ＡＭＤ３１０呈（ｘｌＯＯ）；ｂ：?Ｇ－ＣＳＦ＋ＡＭＤ３

；ｗｉ．Ｂ＊??ＰＢ?ＣＦＵ－Ｆｓ??图１－２：?Ｇ－ＣＳＦ、ＡＭＤ３１００对ＭＳＣｓ的动员作用结果??２５??

图１－３各组流式细胞仪检测ＣＤ４５－ＣＤ９０＋细胞群比例结果??

细胞进行鉴定。结果显示：传代后ＰＢＭＳＣｓ生长均一稳定，呈长梭形，旋涡样排??列（图ｌ－４ａ，ｂ），第二代ＰＢＭＳＣｓ生长曲线表明：接种后１－２天细胞处于生长潜伏??期，３－５天进入对数生长期，接种６－７天后进入平台期，呈“Ｓ”形（

图１４：?ＰＢＭＳＣｓ传代培养ａ：第二代ＰＢＭＳＣｓ培养７天细胞形态与原代相似，呈梭??形（ｘｌ〇〇）；?ｂ：ＰＢＭＳＣｓ７呈，（ｘｌ〇〇）

充质干细胞增殖形态类似。流式细胞仪分析结果表明：细胞表面造血系标记ＣＤ３４、??ＣＤ４５阴性，而ＣＤ４４、ＣＤ９０强阳性，符合间充质干细胞生物学特性（图１－６）。??多向分化能力检测显示：ＰＢＭＳＣｓ在成骨诱导液作用下，１周时细胞开始聚集，??增殖速度明显减慢，随后在镜下可见结节....

图１－７?Ｐ２ＰＢＭＳＣｓ成骨、成软骨、成脂诱导分化

本文编号：4019693