CMC-TAT蛋白转导肽纳米载体体外转染效果评估

发布时间：2017-10-20 13:40

  本文关键词：CMC-TAT蛋白转导肽纳米载体体外转染效果评估

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【摘要】：目的构建羧甲基壳聚糖-TAT蛋白转导肽纳米载体(CTNs),探究CTNs介导miR96转染293细胞和耳蜗基底膜的效率及安全性,为mi R96在内耳的功能研究奠定基础。方法应用羧甲基化的壳聚糖(CMC)与TAT蛋白转导肽合成CTNs,携带标记花青染料荧光(cy3)的mi R96模拟物(mi R96 mimics),转染293细胞和耳蜗基底膜,利用激光共聚焦荧光显微镜对293细胞和耳蜗基底膜铺片进行荧光阳性细胞计数,以阳离子脂质体作为对照,评价转染效率,采用MTT试验评价CTNs的安全性。结果成功制备了CTNs,纳米颗粒平均直径约186.6nm,粒径分布集中,无明显聚集现象;CTNs-mi R96-cy3转染293细胞的平均阳性细胞率为32.6%,转染耳蜗基底膜毛细胞的平均阳性细胞率为24.4%,均低于阳离子脂质体-mi R96-cy3;MTT试验示CTNs细胞毒性低于阳离子脂质体。结论 CTNs作为一种新型的纳米载体,可携带miR96成功转染耳蜗基底膜,提示了纳米载体作为miRNA载体的可行性,并且安全性较高,但转染效率不足。
【作者单位】： 中国人民解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科聋病教育部重点实验室;中国科学院国家纳米科学中心;
【关键词】： 羧甲基壳聚糖-TAT蛋白转导肽纳米载体 miRNA miR 内耳转染
【基金】：国家863青年科学家项目(2014AA020510) 国家自然科学基金面上项目(81470683) 中国科协创新驱动助力工程(2016CX-QD01) 国家973计划重大科学研究计划干细胞项目(2012CB967900,其子课题:2012CB967901,2012CB967903)
【分类号】：R764.43
【正文快照】： 随着基因技术的发展,研究发现多种miRNA在小鼠耳蜗中高表达,其中mi R96被证实与耳蜗毛细胞的分化、发育及人类听力损失密切相关[1-5]。选择合适的载体将mi R96递送至内耳是实现其外源性干预的关键。最常用的载体为病毒载体和非病毒载体。病毒载体有诱发免疫反应、潜在致癌等风

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本文编号：1067462