小鼠胚胎干细胞条件培养基体外促进人角膜内皮细胞增殖的研究

发布时间：2017-11-14 15:05

  本文关键词：小鼠胚胎干细胞条件培养基体外促进人角膜内皮细胞增殖的研究

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【摘要】：目的观察小鼠胚胎干细胞条件培养基(mouse embryonic stem cells conditioned medium,ESC-CM)是否可以在体外促进人角膜内皮细胞(human corneal endothelial cells,HCECs)的增殖。方法利用角膜内皮后弹力层组织块方法进行原代培养P0 HCECs。实验组使用含有25%ESC-CM的培养液进行培养,对照组使用普通角膜内皮细胞培养液(corneal endothelium medium,CEM)进行培养。倒置相差显微镜、反转录聚合酶链反应(reverse-transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)鉴定HCECs;倒置相差显微镜观察细胞的形态及萌出时间;Western Blot、免疫组织化学法观察HCECs的泵相关功能蛋白(zona occludens protein-1,ZO-1)及Na~+-K~+-ATP酶的表达。Giemsa染色细胞克隆实验、免疫组织化学及流式细胞学检测Ki67阳性率的方法比较HCECs的增殖能力;流式细胞学方法检查细胞周期及细胞凋亡情况。Western Blot和免疫组织化学方法检测细胞周期负性调节蛋白P21的水平,初步探讨其可能的作用机制。结果原代培养时,25%ESC-CM组培养的HCECs P2细胞爬出,细胞形态呈典型多角形结构。CEM在P2时细胞形态变大,失去了多角形结构。25%ESC-CM组和CEM组均表达ZO-1、Na~+-K~+-ATP酶。25%ESC-CM组的Ki67阳性率、克隆形成数量、进入到细胞周期S期和G2期的比例均高于CEM组(均为P0.05)。25%ESC-CM组的细胞凋亡数量和P21阳性率均低于CEM组(均为P0.05)。结论 25%ESC-CM组可显著促进HCECs增殖;其作用可能是通过抑制P21蛋白的表达和抑制细胞凋亡实现的,为HCECs体外大量扩增提供了一种新方法。
【作者单位】： 郑州大学第一附属医院眼科;
【分类号】：R77
【正文快照】： 人角膜内皮细胞(human corneal endothelialcells,HCECs)因其泵-漏功能在维持角膜透明性中发挥重要作用,但在体HCECs很难再生,一些角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)功能障碍性疾病常会导致视力的下降甚至丧失,角膜移植手术是治疗此类疾病的重要方法[1],但角膜供

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本文编号：1185880