A2E在蓝光致人RPE细胞损伤过程中对溶酶体膜通透性的影响

发布时间：2017-11-21 01:14

  本文关键词：A2E在蓝光致人RPE细胞损伤过程中对溶酶体膜通透性的影响

  更多相关文章： N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺 年龄相关性黄斑变性 视网膜色素上皮 凋亡 溶酶体

【摘要】：目的:本课题拟通过建立A2E及蓝光诱导RPE细胞损伤模型,探讨A2E在蓝光致人RPE细胞损伤过程中对溶酶体膜通透性的影响,为后续实验提供基础。方法:(1)采用MTT法检测不同浓度A2E负载RPE细胞培养不同时间后RPE细胞活力,确立A2E负载RPE细胞的最适宜浓度;(2)利用荧光显微镜观察RPE细胞分别负载浓度为0、10、25、50μM A2E后RPE细胞中荧光强度变化;(3)将细胞分为四组:对照组、单纯蓝光光照组、A2E负载组、A2E负载+蓝光光照组。TUNEL法、流式细胞仪检测RPE细胞凋亡情况;(4)吖啶橙(AO)标记,运用激光扫描共聚焦显微镜观察A2E负载后RPE细胞内溶酶体膜通透性变化并利用共聚焦软件对荧光强度进行分析。结果:(1)MTT比色法显示,A2E(10μM、25μM、50μM)作用于RPE细胞12h、24h、48h、72h,细胞增殖率随浓度增加出现下降趋势。当A2E负载浓度为10μM时,细胞培养12h、24h、48h、72h时,与对照组比较,差异均无统计学意义(P=0.821,0.641,0.406,0.572);当A2E负载浓度为25μM、50μM时,在细胞培养12h时,与对照组比较,差异无统计学意义(P=0.169,0.058);当A2E负载浓度为25μM、50μM时,在24h时,OD值分别为(0.423±0.035)、(0.349±0.010),低于对照组(0.508±0.035),差异均有统计学意义(P=0.000,0.000);当A2E负载浓度为25μM、50μM时,在48h时,OD值分别为(0.544±0.042)、(0.439±0.086),低于对照组(0.688±0.064),差异有统计学意义(P=0.028,0.002);当A2E负载浓度为25μM、50μM时,在72h时,OD值分别为(0.661±0.021)、(0.430±0.082),低于对照组(0.878±0.032),差异均有统计学意义(P=0.000,0.000)。因此,我们选择浓度为25μM的A2E负载于RPE细胞进行后续实验研究。(2)不同浓度A2E负载RPE细胞后,荧光显微镜观察发现随着A2E的负载浓度增加,RPE细胞胞浆内荧光强度逐渐由绿色变为黄色。(3)流式细胞仪检测:对照组RPE细胞凋亡率(3.39±0.15%)、A2E负载组凋亡率(4.61±1.44%)、单纯蓝光光照组(8.21±0.52%)、蓝光+A2E负载组(24.77±1.49%)。各组间比较,差异有统计学意义(F=130.292,P=0.000)。光照组、A2E负载+蓝光光照组凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P=0.004,0.000);A2E负载组与对照组比较,差异无统计学意义(P=0.348);A2E负载+光照组较光照组及A2E负载组凋亡率高,差异有统计学意义(P=0.000,0.000);光照组较A2E负载组凋亡率高,差异有统计学意义(P=0.019)。(4)TUNEL法检测各组细胞凋亡情况:对照组(10.40±2.46%)、A2E负载组(24.07±1.17%)、单纯蓝光光照组(43.00±4.41%)、A2E负载+光照组(53.00±4.50%)。各组间比较,差异有统计学意义(F=92.423,P=0.000)。A2E负载组、光照组、A2E负载+蓝光光照组凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P=0.001,0.000,0.000);A2E负载+光照组较光照组及A2E负载组凋亡率高,差异有统计学意义(P=0.007,0.000);光照组较A2E负载组凋亡率高,差异有统计学意义(P=0.000)。(5)光照组、A2E负载组、A2E负载+光照组与对照组比较红色颗粒状荧光均减弱,胞浆的绿色荧光增强。利用Leica Confocal Software(LCS Lite)进行荧光强度分析,4组平均荧光强度(红色)分别为:对照组(37.00±1.30)、光照组(29.48±0.62)、A2E负载组(32.37±0.72)、A2E负载+光照组(22.16±0.73)。各组间整体平均荧光强度比较,差异有统计学意义(F=246.955,P=0.000)。光照组、A2E负载组及A2E负载+光照组均低于对照组,差异有统计学意义(P=0.000,0.000,0.000);光照组低于A2E负载组,差异有统计学意义(P=0.000);A2E负载+光照组低于光照组、A2E负载组,差异有统计学意义(P=0.000,0.000)。结论:(1)A2E负载RPE细胞的最适宜浓度为25μM。(2)蓝光光照、A2E联合蓝光光照可导致RPE细胞凋亡,且两者具有协同作用。(3)A2E、蓝光光照、A2E联合蓝光光照可导致RPE细胞内溶酶体膜通透性增加。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R774

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 李海辉;蔡善君;宫鑫;武志鹏;吕建平;宿罡;谢兵;;蓝光对人视网膜色素上皮细胞α1D亚基蛋白表达及分泌VEGF和bFGF的影响[J];中华眼科杂志;2014年11期

2 Qiu-xia JIN;Xin-ran DONG;Jing-meng CHEN;Ke YAO;Ya-lin WU;;有机溶剂对两种视网膜色素上皮脂褐质荧光色素的影响(英文)[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2014年07期

3 Ya-lin WU;Jie LI;Ke YAO;;Structures and biogenetic analysis of lipofuscin bis-retinoids[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2013年09期

4 刘镭;张真真;;实时监测溶酶体光损伤诱导细胞凋亡过程中Bax定位的时空变化[J];激光生物学报;2013年03期

，

本文编号：1209172