维生素C保护视网膜色素上皮细胞的相关机制研究

发布时间：2017-11-23 21:42

  本文关键词：维生素C保护视网膜色素上皮细胞的相关机制研究

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【摘要】：目的研究氧化应激状态下维生素C作为抗氧化剂对视网膜色素上皮细胞的保护作用以及维生素C和SIRT1之间的调节机制。方法以人视网膜色素上皮细胞-19(ARPE-19)细胞为研究对象,分为空白对照组,无维生素C组(0μmol),低浓度维生素C组(20μmol),中等浓度维生素C组(100μmol)和高浓度维生素C组(500μmol)。培养过程中添加不同浓度维生素C之后对细胞加以H2O2(100μmol)处理12 h或24 h建立氧化应激模型。利用MTT法检测ARPE-19细胞存活率,膜联蛋白V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡以及活性氧(ROS)试剂盒测定细胞内活性氧的改变。使用SIRT1靶向siRNA进行SIRT1敲除,细胞使用预定浓度的维生素C进行孵育,并分为空白对照组,阴性对照组,siRNA干扰组。先用10 m M SIRT1激动剂白藜芦醇(RSV)和5 m M SIRT1抑制剂烟酰胺(NA)对细胞进行孵育,然后加入H2O2(100μmol)处理12 h或24 h,RT-PCR及Western blot方法检测SIRT1、p53和Foxo3基因表达水平。结果经过H2O212 h处理后,较高浓度的维生素C(500μmol)与较低浓度(20μmol)的维生素C无明显保护作用,而中等浓度的维生素C(100μmol)能够显著提高细胞的生存能力(P0.05),减少ARPE-19细胞的凋亡数量(P0.05),降低细胞内ROS水平(P0.05),差异有统计学意义。维生素C的作用可上调H2O2作用后SIRT1转录因子和应激反应因子(p53和Foxo3)的表达。RSV及NA可分别上调及下调维生素C对H2O2刺激的ARPE-19细胞存活力,细胞凋亡和细胞内ROS水平的影响。RT-PCR及Western blot结果表明:维生素C浓度增加时,SIRT1表达增加,p53和Foxo3基因表达水平升高。敲除或上调SIRT1表达,可相应明显地增加或减少p53和Foxo3转录和蛋白水平的表达。结论维生素C可降低细胞内ROS水平,减少ARPE-19细胞凋亡,起到抗氧化损伤保护作用,有望成为年龄相关性黄斑变性的有效治疗方法。
【作者单位】： 内蒙古自治区人民医院眼科;内蒙古医科大学附属医院神经内科;
【基金】：内蒙古自治区人民医院院内基金项目(项目编号:201540)
【分类号】：R774
【正文快照】： 年龄相关性黄斑变性(age-related macular degen-eration,AMD)是导致老年人视力缺损的最常见原因[1,2]。研究表明,抗氧化物可以减缓AMD的发病进程[3]。在AMD发病机制中,氧化应激起到了重要作用[1,4]。视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epitheli-um,RPE)通过补充营养素为感

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2 姜岩,何世坤;氧化应激反应对视网膜色素上皮细胞迁移的影响及相关机制的探讨[J];中华眼科杂志;2005年02期

3 李兵,范贤勇,俸家富,李少林;鼻咽癌患者血清铜与氧化应激反应的相关性研究[J];重庆医科大学学报;2003年02期

4 ;[J];;年期

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本文编号：1219935