SB203580对体外培养人胚胎眼巩膜成纤维细胞的影响

发布时间：2017-12-04 21:40

  本文关键词：SB203580对体外培养人胚胎眼巩膜成纤维细胞的影响

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【摘要】：近视的发病机制尚未完全阐明,且目前全球范围内并没有发现针对近视有效的治疗方式及干预措施。但随着国内外学者对近视研究的进一步加深,发现多种生长因子、神经递质等通过介导某些信号转导通路参与近视形成及发展。异常的视觉信号刺激视网膜,引起相应的信号因子等表达发生改变,并将信号传导至脉络膜及巩膜,最终导致巩膜重塑、眼轴延长、屈光度改变以致近视形成。巩膜组织中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制剂-2(tissue inhibitor of metalloproeinases-2,TIMP-2)比例失调,使巩膜细胞外基质(extracellular matrix,ECM)减少流失,尤其是Ⅰ型胶原的减少,导致巩膜变薄。多种信号转导通路被证明与巩膜重塑及近视形成密切相关。P38MAPK信号转导通路属于MAPK信号转导通路家族,在豚鼠巩膜组织及体外培养的人胚胎眼巩膜成纤维细胞(Human fetal scleral fibroblasts,HFSFs)中均检测到其表达,且在豚鼠实验性近视眼巩膜组织中表达增强。本实验体外培养HFSFs,并使用P38MAPK信号转导通路抑制剂SB203580对细胞进行干预,拟探讨SB203580对HFSFs的影响以及可能与近视发生机制的关系。目的观察不同浓度SB203580对体外培养HFSFs细胞增殖能力、MMP-2、TIMP-2和Ⅰ型胶原m RNA相对表达量的影响,以及Ⅰ型胶原蛋白合成的分布及表达量的变化。探讨SB203580对HFSFs细胞的影响,以及SB203580可能对近视发生发展过程产生的影响及作用机制。方法体外培养HFSFs,选取5-7代细胞进行实验。所有细胞分为两组,对照组及实验组。实验组HFSFs接受不同浓度SB203580刺激,分别为0.1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L;药物刺激48h。对照组不接受药物刺激。CCK8法检测各组细胞增殖情况;逆转录-聚合酶链反应(Revers TranscriptionPolymerase Chain Reaction,RT-PCR)法检测MMP-2、TIMP-2及Ⅰ型胶原m RNA相对表达量;免疫荧光(Immunofluorescence,IF)法检测Ⅰ型胶原蛋白分布及表达。结果1 SB203580对HFSFs细胞增殖的影响药物干预48h后CCK8法检测各实验组及对照组细胞于450nm波长处吸光值(OD值),对照组OD值0.908±0.020,各实验组根据药物浓度从低到高OD值依次为0.902±0.264、0.900±0.026、0.878±0.040、0.886±0.029、0.883±0.041。各实验组与对照组相比差异无统计学意义(P0.05),OD值无明显变化。2 SB203580对MMP-2、TIMP-2及Ⅰ型胶原m RNA相对表达量的影响RT-PCR法检测各组MMP-2、TIMP-2及Ⅰ型胶原m RNA相对表达量。各实验组根据药物浓度从低到高,MMP-2m RNA相对表达量依次为0.966±0.022、0.920±0.023、0.847±0.027、0.758±0.030、0.704±0.010,与对照组(相对表达量为1)相比差异有统计学意义(P0.05),其相对表达量均有不同程度降低;TIMP-2m RNA相对表达量依次为1.002±0.064、1.013±0.079、1.007±0.086、1.038±0.060、0.990±0.090,与对照组(相对表达量为1)相比差异无统计学意义(P0.05),其相对表达量无明显变化;Ⅰ型胶原m RNA相对表达量依次为1.082±0.061、1.162±0.051、1.390±0.017、1.521±0.102、1.732±0.087,与对照组相比,0.1μmol/L实验组差异无统计学意义(P0.05),其余各实验组差异有统计学意义(P0.05),Ⅰ型胶原m RNA相对表达量有不同程度的增高。3 SB203580对Ⅰ型胶原的分布及蛋白表达的影响IF法检测Ⅰ型胶原于对照组及各实验组均有表达。与对照组相比0.1μmol/L实验组Ⅰ型胶原表达未见明显增高,其余各实验组Ⅰ型胶原表达均有不同程度增高。结论1.SB203580可在一定浓度范围内抑制MMP-2表达,同时能促进Ⅰ型胶原的合成。2.P38MAPK信号转导通路可能参与近视的形成与,其抑制剂SB203580可能在一定程度上干预近视形成。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R778.11

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