构建TGF β1介导的角膜基质ECM纤维化体外三维培养模型的研究

发布时间：2017-12-04 22:22

  本文关键词：构建TGF β1介导的角膜基质ECM纤维化体外三维培养模型的研究

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【摘要】：背景：角膜损伤修复过程中细胞外基质纤维化是角膜瘢痕的形成基础。转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor β1, TGFβ1)引起角膜基质过度产生细胞外基质(Extracellular Matrix, ECM)。我们在前期研究工作中构建了角膜基质三维培养模型,现设想将TGFβ1添加于该三维培养体系中,达到构建角膜基质ECM纤维化的体外三维培养模型。目的：构建角膜基质体外三维培养模型,评估TGFβ1对该三维培养模型中细胞外基质纤维化相关基因表达的影响,确定该三维培养体系是否可以作为角膜基质纤维化细胞外基质的体外三维培养候选模型。方法：分离牛角膜基质细胞,构建体外三维培养模型Pellet,根据培养液成份不同分为3组：(1)对照组：基础培养液组(DMEM/F12+10%胎牛血清),(2)T1低浓度组：基础培养基+TGF-β1 (0.5ng/ml), (3)T1高浓度组：基础培养基+TGF-β1 (1ng/ml)。培养2w时用钙黄绿素／碘化丙啶法(Calcein AM/PI)法进行细胞活性测定；应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)和蛋白印迹法(Western Blot)检测培养48h,1w,2w的3组Pellet的a-平滑肌肌动蛋白(α Smooth Muscle Actin, αSMA)、Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ, ColⅠ)、Ⅲ型胶原(Collagen Ⅲ, Col Ⅲ)等基因的表达,并对结果进行统计学分析。结果：(1)Calcein AM/PI法显示经过2w的培养,Pellet绝大多数细胞存活；(2)αSMA, ColⅠ, Col Ⅲ的mRNA表达：①在培养48h、1w、2w,无论是T1高浓度组和T1低浓度组表达均显著高于对照组,具有浓度-效应关系；②无论是T1高浓度组和T1低浓度组,Col Ⅲ mRNA合成速率均大于Col I mRNA的合成速率；(3)Western Blot仅在培养后2w检测到αSMA, ColⅠ, Col Ⅲ的表达。结论：含0.5ng/ml或1ng/ml的TGFβ1及血清的培养液均可使牛角膜基质细胞体外三维培养模型Pellet中的角膜基质细胞mRNA水平及蛋白质水平上表达αSMA、ColⅠ、Col Ⅲ。该培养体系可作为角膜基质ECM纤维化的体外三维培养候选模型。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R772.2

【参考文献】

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1 李霞;谭少健;;三维培养与角膜基质组织工程学研究进展[J];微创医学;2012年04期

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本文编号：1252572