视网膜新生血管形成中Cathepsin B和VEGF的相关性研究

发布时间：2017-12-05 19:16

  本文关键词：视网膜新生血管形成中Cathepsin B和VEGF的相关性研究

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【摘要】：目的:建立小鼠氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)模型,观察OIR模型鼠视网膜的Cathepsin B和VEGF的表达变化以及Cathepsin B-RNAi-Lentivirus对视网膜新生血管的抑制作用,探讨在小鼠视网膜新生血管形成中Cathepsin B和VEGF的关系。方法:44只7日龄(P7)的健康C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型对照组、NC-GFP-Lv组和CB-RNAi-Lv组,共四组,每组11只,22眼。正常组的小鼠在自然状态下生长,不进行干预。其余三组小鼠在P7时放于氧体积分数为(75±2)%的密封氧箱内饲养,5天后(P12)出氧箱,继续在自然环境中喂养,以建立小鼠OIR模型;其中,模型对照组不予任何干预,NC-GFP-Lv组和CB-RNAi-Lv组的小鼠在P13时分别给予玻璃体腔内注射NC-GFP-Lentivirus和Cathepsin B-RNAi-Lentivirus各1μl。各组小鼠在P17时使用异硫氰酸葡聚醛荧光素行心脏灌注并对视网膜进行铺片,用荧光显微镜观察和对比各组视网膜血管的生成情况和分布改变;收集各组小鼠的视网膜,采取Real-time PCR技术测定各组视网膜中Cathepsin B和VEGF mRNA的表达量;用Western blot技术分别测定各组Cathepsin B和VEGF蛋白的表达量。结果:视网膜铺片显示:正常组小鼠视网膜血管走行正常、规则,无新生血管生成;模型对照组和NC-GFP-Lv组视网膜的血管有明显分层和分支,毛细血管和血管吻合较多,可见新生血管扭曲,并且向深部走行;CB-RNAi-Lv组视网膜新生血管明显减少,血管分层和分支相对不明显,毛细血管数目相对降低。与正常组相比,模型对照组视网膜Cathepsin B和VEGF mRNA及蛋白的表达水平增高,差异均有统计学意义(P0.05)。模型对照组视网膜的Cathepsin B和VEGF mRNA及蛋白的表达水平与NC-GFP-Lv组相比,差异无统计学意义(P0.05)。与NC-GFP-Lv组相比,CB-RNAi-Lv组视网膜的Cathepsin B和VEGF mRNA及蛋白的表达水平降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:(1)高氧诱导的视网膜新生血管形成中Cathepsin B和VEGF高表达。(2)Cathepsin B-RNAi-Lentivirus可以抑制Cathepsin B和VEGF mRNA和蛋白的水平。(3)推断VEGF表达的改变可能是受Cathepsin B表达的影响。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R774.1

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本文编号：1255889