腹腔注射NR2B受体阻断剂对单眼剥夺小鼠初级视皮层V1B区NMDA受体亚基表达的影响

发布时间：2017-12-08 20:04

  本文关键词：腹腔注射NR2B受体阻断剂对单眼剥夺小鼠初级视皮层V1B区NMDA受体亚基表达的影响

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【摘要】：目的研究单眼形觉剥夺(Monocular deprivation,MD)小鼠腹腔注射N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methy-D-aspartate,NMDA)亚基受体阻断剂后视皮层NMDA受体亚基NR2A、NR2B表达变化。探讨NR2A、NR2B发育性变化及NR2B亚基受体阻断剂通过血脑屏障作用于视皮层的可行性,为探索弱视机制及相关药物治疗提供实验基础。方法1.生后24天健康C57BL/6小鼠20只将小鼠随机分4组,每组5只。分别为:正常对照组(N组);腹腔注射Ifenprodil组(Ifenprodil组);单眼剥夺组(MD组),单眼剥夺+腹腔注射Ifenprodil组(MD+Ifenprodil组),每组5只。形觉剥夺为生后24天缝合右眼,制备形觉剥夺模型。腹腔注射Ifenprodil组,生后24天健康C57BL/6小鼠,分别于单眼剥夺第1、3、5天腹腔注Ifenprodil,给药剂量为10mg/kg;单眼剥夺+腹腔注射ifenprodil组,单眼剥夺后同时对小鼠腹腔注射Ifenprodil,给药计量、频率同腹腔注射组。所有实验组小鼠均在自然光线环境下饲养。麻醉致死断头取脑。2.冰冻切片采用HE染色及免疫荧光组织化学方法检测小鼠双侧视皮层NMDA受体亚基NR2A、NR2B的表达。3.采用荧光实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR)检测各组小鼠视皮层NMDA受体亚基NR2Am RNA和NR2Bm RNA的相对表达量。应用2-△△CT法计算NR2A、NR2B基因的相对表达量。统计方法:所有统计资料采用均数±标准差;同组内小鼠左右侧视皮层数据的差异采用配对t检验;各组间同侧视皮层数据的差异采用双因素方差分析,当P0.05为差异具有显著性。结果1.HE染色显示,腹腔注射Ifenprodil组、单眼剥夺组、单眼剥夺+腹腔注射Ifenprodil组及正常对照组小鼠两侧视皮层神经元细胞结构的构筑清晰,层次分明,视神经各层神经元排列整齐,与正常组比较未见明显异常。2.免疫荧光结果显示受体阳性细胞主要位于细胞膜及细胞胞浆。各组内视皮层NR2A表达结果如下:四组小鼠视皮层NR2A、NR2B相对表达:N组及Ifenprodil组左右侧视皮层NR2A、NR2B相对表达差异无显著性(P=0.834,P=0.727;P=0.837,P=0.624)。MD组剥夺眼对应视皮层较之非剥夺眼对应视皮层NR2A表达降低(t=-2.485,P0.05)、NR2B的表达增多(t=4.404,P0.05)。MD+Ifenprodil组剥夺眼对应视皮层较之非剥夺眼对应视皮层NR2A表达减少(t=-3.596,P0.05),NR2B表达差异无显著性。四组小鼠左侧视皮层NR2A、NR2B相对表达:与N组相比,MD组与MD+Ifenprodil组较之N组剥夺眼对应视皮层NR2A表达减少(t=-0.315,P0.05;t=-3.397,P0.05);较之Ifenprodil组,MD+Ifenprodil组NR2A表达减少(t=4.716,P0.05)。MD组NR2B表达量较之N组表达增多(t=-6.812,P0.05),Ifenprodil组与MD+Ifenprodil组较N组左侧视皮层NR2B表达相对减少(t=5.633,P0.05;t=5.409,P0.05);四组小鼠右侧视皮层NR2A、NR2B相对表达:与N组相比,Ifenprodil组、MD组与MD+Ifenprodil组非剥夺眼对应视皮较N组NR2A表达增多(t=-4.168,P0.05;t=-2.619,P0.05;t=-3.397,P0.05)。Ifenprodil组与MD+Ifenprodil组较N组右侧视皮层NR2B相对表达减少(t=5.316,P0.05;t=6.366,P0.05)。3.实时荧光定量PCR结果显示,以内参照GAPDH基因及正常对照组基因表达为标准。以正常对照组变化倍数为1,各组内视皮层NR2Am RNA表达结果如下:四组小鼠左右侧视皮层NR2A m RNA、NR2B m RNA相对表达分析:N组及Ifenprodil组左右侧视皮层NR2A m RNA、NR2B m RNA相对表达无显著性差异(P=0.975,P=0.884;P=0.859,P=0.906)。MD组剥夺眼对应视皮层较之非剥夺眼对应视皮层NR2A m RNA的表达减少(t=-9.201,P0.05)、NR2B m RNA的表达增多(t=9.876,P0.05)。MD+Ifenprodil组剥夺眼对应视皮层NR2A m RNA表达减少(t=-7.436P0.05)。四组小鼠左侧视皮层NR2A m RNA、NR2B m RNA相对表达分析:与N组相比,Ifenprodil组剥夺眼侧视皮层NR2A m RNA表达增多(t=-4.352,P0.05),MD组与MD+Ifenprodil组较N组NR2A m RNA表达量减少(t=8.861,P0.05);MD组NR2B m RNA表达较之N组表达升高,Ifenprodil组与MD+Ifenprodil组较N组左侧视皮层NR2B m RNA相对表达降低(t=4.379,P0.05;t=5.445,P0.05)四组小鼠右侧视皮层NR2A m RNA、NR2B m RNA相对表达量分析:与N组相比,Ifenprodil组、MD组与MD+Ifenprodil组非剥夺眼侧较N组NR2A m RNA表达增多(t=-2.746,P0.05;t=-3.932,P0.05;t=-3.511,P0.05)。MD组NR2B m RNA表达减少(t=-3.932,P0.05),Ifenprodil组与MD+Ifenprodil组较N组右侧视皮层NR2B m RNA相对表达降低(t=4.379,P0.05;t=5.445,P0.05)。结论:1.视皮层正常发育时,NMDA受体亚基的表达呈发育依赖变化,即:NR2A表达增加,NR2B表达减少。单眼形觉剥夺影响NMDA受体亚基表达,剥夺侧视皮层NR2A表达减少,NR2B表达增加。非剥夺侧NR2A表达增加,NR2B表达减少。2.腹腔注射Ifenprodil,可经血脑屏障,选择性作用于视皮层NMDA受体NR2B亚基。3.NMDA受体阻断剂可以较充分的抑制NR2B亚基的表达,为探索单眼剥夺性弱视机制及药物治疗寻找突破口。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R77

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2 姚军平;祝芹芳;;视皮层可塑性的分子生物学研究进展[J];中国医药指南;2012年15期

3 李O灿，

本文编号：1267648