mTOR信号通路在视乳头部位活化的星形胶质细胞中的作用
本文关键词:mTOR信号通路在视乳头部位活化的星形胶质细胞中的作用
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【摘要】:目的:本课题旨在探讨视神经乳头星形胶质细胞活化过程中m TOR信号通路的蛋白表达,并进一步探讨雷帕霉素对m TOR信号通路下游相关蛋白的调节作用机制。方法:培养成年雄性SD大鼠视乳头部位原代星形胶质细胞,进行细胞纯化以及GFAP鉴定后进行下一步实验,细胞生长至对数生长期,采用不同浓度表皮生长因子(EGF)刺激细胞,表皮生长因子的浓度:con,20ng/ml,40ng/ml,培养1小时后,进行GFAP蛋白印迹检测,观察细胞的活性状态,及p-Akt、p-m TOR、p-S6K的蛋白表达情况,确定本实验的最佳浓度。然后采用10μM雷帕霉素(RAPA)预处理星形胶质细胞,分为四组:正常对照组、EGF组、RAPA组、EGF+RAPA组,然后进行p-Akt、p-m TOR、p-S6K的蛋白印迹法检测蛋白表达量。结果:视神经乳头原代星形胶质细胞免疫荧光染色GFAP鉴定达95%纯度以上,然后用于本研究。不同浓度EGF刺激星形胶质细胞后,蛋白印迹法检测结果表明EGF浓度为40ng/ml时GFAP的表达显著升高,p-Akt在两不同浓度EGF刺激时表达均上调,且有统计学意义,p-m TOR、p-S6K的蛋白表达也上调,但只在EGF浓度为40ng/ml时有统计学意义。雷帕霉素预处理后,EGF+RAPA组的p-m TOR、p-S6K表达量和EGF组相比明显下降,且具有统计学上的差异(p0.01),p-Akt表达与EGF组相比无明显差异亦无统计学意义。RAPA组与对照组相比p-m TOR、p-S6K表达量明显下降,且有统计学差异(p0.01),p-Akt蛋白表达无明显变化。结论:EGF诱导视神经乳头原代星形胶质细胞活化过程中m TOR信号通路相关蛋白p-Akt、p-m TOR、p-S6K表达上调,雷帕霉素(m TOR抑制剂)抑制EGF诱导的星形胶质细胞p-m TOR、p-S6K的表达,雷帕霉素可能通过m TOR通路抑制星形胶质细胞活化而参与青光眼视神经保护。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R77
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,本文编号:1285583
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