预诱导培养的成人外周血单个核细胞在视网膜下腔移植后存活和功能修复的研究

发布时间：2017-12-20 14:32

  本文关键词：预诱导培养的成人外周血单个核细胞在视网膜下腔移植后存活和功能修复的研究　出处：《中山大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：第一章成人外周血单个核细胞的分离及体外预诱导培养目的:从成人外周血中分离出单个核细胞,并进行预诱导培养,从形态和基因水平观察其变化。方法:应用密度梯度离心法将外周血单个核细胞从健康成人的外周血中分离出来,然后与新生大鼠的视网膜组织进行共培养4天,倒置显微镜观察其形态变化,实时定量PCR检测预诱导前后细胞RNA表达的变化。预诱导培养结束后将细胞用于小鼠的视网膜下腔移植。结果:新鲜分离的成人外周血单个核细胞圆形透亮,在神经干细胞培养液中散在分布,悬浮生长。随后三天,部分细胞依然是圆形悬浮生长;而部分细胞逐渐发生形态变化,有些细胞贴壁生长,伸出一到三个短小的突起;还有部分细胞聚集呈团状半贴壁生长。实时定量PCR结果显示,预诱导培养后Nestin、βⅢ-tubulin、Rhodopsin、MAP2、GFAP、Synapsin、CD14、CD44、CD45、CD11b、CD19的RNA表达量提高,而CD16、CD3、CD34、Vimentin的表达量下降,其中MAP2、Rhodopsin、CD19和Vimentin的变化有统计学差异。结论:成人外周血单个核细胞在预诱导培养后有向神经细胞及光感受器细胞分化的趋势。第二章:预诱导培养后的成人外周血单个核细胞移植到模式小鼠视网膜下腔后的存活及功能修复情况目的:观察预诱导培养的成人外周血单个核细胞在视网膜下腔移植后的存活及功能修复的情况。方法:将预诱导培养后的成人外周血单个核细胞经视网膜下腔注射移植到12月龄的rd1和rds小鼠右眼中。6个月后,取rds小鼠的实验眼做冰冻切片及免疫荧光染色,用共聚焦显微镜观察移植细胞的存活和在视网膜各层的分布及表达各种标志物的情况。细胞移植后的rd1小鼠,分别于1个月、3个月及5个月的时候做双眼的全视野视网膜电图检测,然后取实验眼的视网膜组织做PCR,检测移植细胞的存活情况。结果:移植6个月后rds小鼠治疗眼的冰冻切片显示,成人外周血单个核细胞可分布到内核层和节细胞层,而且部分细胞表达神经干细胞标志物Nestin,神经祖细胞标志物Vimentin、βⅢ-tubulin,神经细胞标志物MAP2,及光感受器细胞标志物Rhodopsin,但有部分移植细胞并没有表达相关的蛋白。PCR结果显示,移植后1、3、5个月,人的细胞色素b基因仍在小鼠的实验眼中有表达,说明移植细胞的存在。全视野视网膜电图结果显示,移植后1个月,所有接受移植的rd1小鼠的双眼都检测不到有对光反应,与未接受移植的对照rd1小鼠表现相同;移植3个月后,所有接受移植的小鼠的双眼都有明显的对光反应,且两眼的表现没有差异;移植5个月后,只有部分治疗小鼠的实验眼保留有对光反应,而所有的对照眼及部分实验眼已失去对光反应。结论:在进行视网膜下腔移植5~6个月后,成人的外周血单个核细胞能在小鼠的视网膜中存活,并且部分细胞仍有表达神经细胞相关标志物及光感受器细胞标志物。在功能方面,成人外周血单个核细胞能在移植后3~5个月发挥其修复作用,但在5个月左右,该作用不能继续维持。
【学位授予单位】：中山大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R774.1

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本文编号：1312450